低滲環(huán)境對(duì)小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　巨噬細(xì)胞是一類(lèi)固有免疫細(xì)胞,在機(jī)體免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。微環(huán)境可影響巨噬細(xì)胞功能,迄今尚未見(jiàn)有關(guān)滲透壓調(diào)控其功能的報(bào)道。本課題觀察低滲環(huán)境對(duì)小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(BMDM)的影響,并初步探討其分子機(jī)制。
　　方法：
　　低滲環(huán)境刺激BMDM,觀察如下指標(biāo):
　　1.BMDM吞噬能力的改變(對(duì)FITC標(biāo)記的葡聚糖及IgG包被的乳膠顆粒的吞噬功能)。
　　2.BMDM抗原提呈能力的改變(

2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDM表面CD80/86、MHCⅡ分子表達(dá))。
　　3.ELISA檢測(cè)BMDM分泌炎性細(xì)胞因子(IL-10、TNF-α)的改變。
　　4.RT-PCR和Westernblot檢測(cè)ClC-2(voltage-gated chloride channel)、ClC-3mRNA及蛋白表達(dá);免疫熒光技術(shù)檢測(cè)蛋白在細(xì)胞內(nèi)分布。
　　5.用siRNA沉默ClC-3,觀察對(duì)低滲調(diào)控BMDM吞噬功能的影響。
　　

3、結(jié)果：
　　1.微環(huán)境低滲可明顯增強(qiáng)BMDM對(duì)FITC標(biāo)記的葡聚糖及IgG包被的乳膠顆粒的吞噬能力。
　　2.低滲環(huán)境對(duì)BMDM抗原提呈功能(CD80/86、MHCⅡ分子表達(dá)水平)無(wú)明顯影響
　　3.低滲對(duì)BMDM分泌IL-10、TNF-α無(wú)明顯影響
　　4.ClC-3在未受刺激的BMDM內(nèi)均勻、彌散分布于胞漿。低滲刺激對(duì)BMDM內(nèi)ClC-3蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯影響,但ClC-3逐漸向細(xì)胞膜聚集。
　　5.應(yīng)