丹皮酚微乳經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、丹皮酚(Paeonol)又稱牡丹酚，是毛莨科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr．)根皮和蘿摩科植物徐長卿Pycnostelma Paniculamm(Bunge)K．Schu全草的主要活性成分，具有鎮(zhèn)靜、催眠、解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗過敏、抗菌等多種藥理活性[1]。丹皮酚在臨床上主要是以多味中藥的主要有效成分復(fù)方應(yīng)用(傷痛酊、雙丹口服液、傷濕涂膜劑、克乳痛膠囊等)，也有以單體形式給藥，上市的制劑主要有丹皮酚注射劑、

2、丹皮酚片以及丹皮酚軟膏。臨床上用于治療風(fēng)濕痛、胃痛和其他疼痛、濕疹、過敏性皮炎等，具有較好療效[2]。本研究將丹皮酚用于經(jīng)皮給藥，克服了治療濕疹、過敏性皮炎等傳統(tǒng)激素類藥物副作用大的缺點，而且具有副作用小、攜帶方便、持續(xù)起效等優(yōu)點。但由于其水溶性差、熔點低、易揮發(fā)、穩(wěn)定性差等缺點，增加了其經(jīng)皮給藥劑型選擇的難度[3]。 微乳(microemulsion，ME)作為一種非常有前景的經(jīng)皮給藥載體，為解決水難溶性藥物的經(jīng)皮吸收提供了一

3、種新的途徑。微乳已用于許多藥物如利多卡因[4]、吲哚美辛[5]、雷公藤內(nèi)酯等透皮制劑的研究。微乳作為經(jīng)皮給藥載體，具有增加親脂性或親水性藥物的溶解度、提高藥物的透皮速率、提高藥物穩(wěn)定性、延長藥物作用時間、維持恒定的有效血藥濃度等優(yōu)點[6-9]，因此微乳用于經(jīng)皮給藥目前已成為藥劑學(xué)研究的熱點。 本課題將丹皮酚制備成微乳經(jīng)皮給藥系統(tǒng)，可望為丹皮酚經(jīng)皮給藥提供一種有效的新劑型。通過繪制偽三元相圖和體外經(jīng)皮滲透實驗篩選處方和制備工藝，并

4、按優(yōu)化處方制備丹皮酚微乳凝膠，對各體系體外透皮吸收進(jìn)行評價，同時考察了微乳制劑的外觀、形態(tài)、粒徑分布以及穩(wěn)定性等。采用微透析取樣技術(shù)結(jié)合LC-MS方法研究了大鼠經(jīng)皮給予丹皮酚微乳、丹皮酚微乳凝膠以及市售軟膏后，皮下組織、血液中丹皮酚濃度隨時間變化規(guī)律，并對其藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行對比研究。 第一部分處方前研究 本研究建立了體外測定丹皮酚含量的高效液相色譜方法。色譜柱：Diamond C18柱(4.6mmx250mm，5μm)；流

5、動相：甲醇-水(70：30)；流速：1.0ml/min；檢測波長：273nm。藥物濃度與峰面積之間成良好線性關(guān)系、精密度好、準(zhǔn)確度高，符合分析要求。同時考察了丹皮酚表觀油水分配系數(shù)、各介質(zhì)中的平衡溶解度等理化性質(zhì)。 第二部分丹皮酚微乳的制備 通過考察丹皮酚在不同油相中的溶解度以及油相的粘度，選擇肉豆蔻酸異丙酯為微乳的油相。通過偽三元相圖的制備，進(jìn)行了表面活性劑、助表面活性劑種類及各組分比例的選擇。通過體外經(jīng)皮滲透實驗，篩

6、選出微乳的最優(yōu)處方，優(yōu)選的處方為肉豆蔻酸異丙酯-卵磷脂-烷基葡萄糖苷-1，2-丙二醇．水(0.58：0.3：0.6：0.45：3)。通過載藥量和制備工藝優(yōu)化，確定丹皮酚微乳最大載藥量為1％，制備工藝為滴加法。 第三部分丹皮酚微乳的質(zhì)量評價及穩(wěn)定性考察 建立了丹皮酚微乳的含量測定方法，對三批微乳進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明制劑質(zhì)量符合要求，并對其外觀形態(tài)、粒徑分布等理化性質(zhì)進(jìn)行考察。微乳穩(wěn)定性的初步考察表明，室溫放置6個月，微乳

7、外觀、粒徑、含量均無明顯變化。 第四部分丹皮酚微乳凝膠的制備及體外經(jīng)皮吸收評價 確定了丹皮酚微乳凝膠的處方及制備工藝，并對其理化性質(zhì)進(jìn)行了初步考察。將丹皮酚微乳、丹皮酚微乳凝膠、丹皮酚飽和水溶液進(jìn)行體外經(jīng)皮滲透實驗比較，丹皮酚飽和水溶液、微乳、微乳凝膠的穩(wěn)態(tài)滲透速率分別為47.846μg·cm-2·h-1、103.760μg·cm-2·h-1和70.401μg·cm-2·h-1，12h的累積滲透量分別為657.179μg

8、·cm-2、1266.484μg·cm-2和881.217μg·cm-2，可見微乳、微乳凝膠的經(jīng)皮滲透作用明顯優(yōu)于丹皮酚飽和水溶液。 第五部分丹皮酚微乳經(jīng)皮給藥系統(tǒng)藥代動力學(xué)研究 本研究將微透析與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)相結(jié)合，利用皮膚、血液同步微透析技術(shù)原位、在體、實時監(jiān)測了丹皮酚在大鼠皮膚、血液中的濃度，獲得丹皮酚在大鼠皮膚、血液中濃度隨時間變化過程的曲線。液相色譜條件為色譜柱：XTerraR MS

9、C18column，2.1mm×l50mm，5μm，(美國Waters公司)；流動相：甲醇：水(85：15，v/v)；流速：0.3mL/mim柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5μL：運行時間：3min。質(zhì)譜條件為氣動輔助電噴霧離子源(ESI源)；負(fù)離子選擇離子監(jiān)測；用于定量分析的離子為m/z=122；毛細(xì)管電壓為4000V；干燥氣流速為8L/min；干燥氣溫度為350℃；霧化器壓力為40psi；裂解器電壓為105eV；碰撞能量為20。丹皮酚在5.

10、25～2100ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。日內(nèi)、日間RSD均小于7％。 體外回收率的測定采用濃差法(增量法、減量法)，體內(nèi)回收率的測定采用減量法。體外回收率實驗結(jié)果顯示：線性探針及同心圓探針增量法和減量法在一定的流速下，不同濃度對線性探針的相對回收率的影響很小，且兩種方法測得的回收率在不同濃度下基本保持一致，線性探針體外回收率的測定結(jié)果為64.06％±5.04％，同心圓探針體外回收率的測定結(jié)果為30.38％4±5.37％。結(jié)果

11、表明，微透析取樣技術(shù)可用于丹皮酚的藥動學(xué)研究，濃差法中的減量法(即體內(nèi)研究中的反透析法)可作為體內(nèi)微透析研究中丹皮酚回收率的測定方法。體內(nèi)回收率實驗結(jié)果顯示：線性微透析探針的體內(nèi)回收率為69.71％±4.80％，同心圓微透析探針的體內(nèi)回收率為51.63％±7.28％。 丹皮酚微乳經(jīng)皮給藥后皮下組織中非結(jié)合型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(334917±10064.2)ng·min/mL，AUC0-∞=(348321.3±9

12、459.8)ng·min/mL，Cmax=(3212.5±166.5)ng/mL，Tmax=(604±0.0)min；丹皮酚微乳經(jīng)皮給藥后血液中非結(jié)合型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(34368.7±2122.8)ng·min/mL，AUC0-∞=(47809.7±1604.1)ng·min/mL，Cmax=(208.6±15.1)ng/mL，Tmax=(76.74±5.8)min。 丹皮酚微乳凝膠經(jīng)皮給藥后皮下組織中非結(jié)

13、合型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(958176.0±49107.1)ng·min/mL，AUC0-∞=(1074505.0±25745.8)ng·min/mL，Cmax=(3825.1±826.5)ng/mL，Tmax=(240.0±113.1)min；丹皮酚微乳凝膠經(jīng)皮給藥后血液中非結(jié)合型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(56142.4±12832.4)ng·min/mL，AUC0-∞=(74385.6±17172.8)n

14、g·min/mL，Cmax=(211.6±21.5)ng/mL，Tmax=(130.0±14.1)min。 丹皮酚市售軟膏經(jīng)皮給藥后皮下組織中非結(jié)合型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(84513.5±23977.3)ng·min/mL，AUC0-∞=(90674.8±25416.0)ng·min/mL，Cmax=(485.1±355.7)ng/mL，Tmax=(60.0±30.5)min；丹皮酚市售軟膏經(jīng)皮給藥后血液中非結(jié)合

15、型藥物藥動學(xué)參數(shù)為：AUC0-660=(67200.8±40771.9)ng·min/mL，AUc0-∞=(78282.6±36704.6)ng·min/mL，Cmax=(285.6±222.6)ng/mL，Tmax=(40.0±23.1)min。 可看出丹皮酚微乳在局部給藥后可在皮膚兩側(cè)快速形成較高的濃度梯度，在60min時就達(dá)到最大藥物濃度，從而大大提高藥物的透皮速率，縮短時滯。而丹皮酚微乳凝膠在給藥后其11h的AUC明顯高