宮頸癌中Drosha的功能及其對蛋白組學(xué)的影響.pdf

1、目的:檢測Drosha在宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)及其表達(dá)所致的細(xì)胞功能的變化和蛋白組學(xué)變化。
　　方法:應(yīng)用慢病毒載體將短發(fā)夾RNA轉(zhuǎn)染至宮頸癌細(xì)胞系中降低其Drosha表達(dá)水平(Droshaknockdown,Dro-KD)。用MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測Drosha表達(dá)水平變化對宮頸癌細(xì)胞增殖的影響,用劃痕試驗(yàn)和遷移試驗(yàn)檢測Drosha表達(dá)水平變化對宮頸癌細(xì)胞遷移的影響。雙向電泳及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析檢測Dro

2、sha表達(dá)水平改變后細(xì)胞蛋白組的變化。
　　結(jié)果:DroshamRNA在宮頸癌細(xì)胞中較正常宮頸上皮細(xì)胞升高60~120倍不等。利用慢病毒導(dǎo)入sh-Dro2936可降低宮頸癌中Drosha表達(dá)。Dro-KD導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞增殖活性及克隆形成能力受到抑制。遷移實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Dro-KD使宮頸癌細(xì)胞遷移能力受到抑制。雙向電泳顯示Dro-KD后宮頸癌細(xì)胞中蛋白點(diǎn)數(shù)量明顯增多。質(zhì)譜分析21個(gè)差異蛋白點(diǎn)檢出包括Tubulin5beta在