鼻咽癌候選轉移相關基因caveolin-1的初步研究.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我國南方省份及東南亞高發(fā)的一種惡性腫瘤，具有明顯的種族聚集性和地域性?，F(xiàn)在的研究認為鼻咽癌是在多種因素協(xié)同作用下，經(jīng)過多步驟、多階段發(fā)生發(fā)展形成的，其發(fā)生可能與EBV病毒、理化環(huán)境因素、遺傳因素等有關。鼻咽癌具有頸淋巴結轉移早、遠處轉移發(fā)生率高等特點，但是目前對鼻咽癌侵襲和轉移的分子機制尚不十分清楚。 Cavcolin-1(Cav-1，窖蛋白或小窩蛋白)是胞膜窖cave

2、olae的主要結構蛋白，由細胞膜內(nèi)陷形成，與小泡運輸，膽固醇穩(wěn)定和細胞信號轉導的調(diào)控相關。Cav-1在終末分化的細胞或者靜止的細胞中高表達，包括脂肪細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等。以往的研究表明，Cav-1基因作為候選抑瘤基因在細胞的增殖中起負性調(diào)控的作用。然而，很多研究小組證實，Cav-1在腫瘤轉移中高表達并能促進腫瘤的發(fā)展。 采用pSIJPER.retro干擾載體系統(tǒng)，構建了針對caveolin-1(Cav-1)的RNA干擾載

3、體(shCav-1)。經(jīng)測序結果證實后，利用脂質體轉染技術將shCav-1導入具有成瘤、高轉移特性的5-8F鼻咽癌細胞株，經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得抗性克隆；RT-PCR結果表明，shCav-1表達載體特異性的引起Cav-1的表達下調(diào)，Western Blot分析表明轉染了shCav-1的5-8F細胞中Cav-1的蛋白表達下調(diào)了95﹪以上，就此，我們已成功地建立穩(wěn)定轉染shCav-1的5-8F細胞株(5-8F-shCav-1)。 隨后，

4、我們進一步考察了Cav-1的表達被干擾后對5-8F細胞的生物學特性的影響。流式細胞分析結果表明，轉染shCav-1后5-8F細胞明顯發(fā)生G0/G1期阻滯現(xiàn)象。 平板克隆形成實驗和MTT比色法觀察5-8F-Cav-1細胞的增殖能力，以轉染pSIUPER．retro空白載體的5-8F細胞(5-8F-pSUPER．retro)作為對照，觀察5-8F-shCav-1細胞的增殖情況，結果表明5-8F-shCav-1細胞的增殖速度明顯低于對

5、照組。提示Cav-1被干擾后導致5-8F細胞的克隆形成能力和增殖能力降低。 利用Matrigel侵襲模型和劃痕實驗證實，Cav-1被干擾后5-8F細胞的侵襲能力和運動能力減弱。裸鼠腹腔內(nèi)接種后成瘤及轉移能力的比較分析結果進一步提示，Cav-1被干擾后5-8F細胞的成瘤和轉移能力均下降。 本實驗利用RNA干擾技術，建立了穩(wěn)定表達shCav-1的干擾細胞株，成功地沉默了Cav-1基因在5-8F細胞中的表達；Cav-1基因被干