EBV-LMP1在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、【目的】 研究EB病毒潛伏膜蛋白1(LMP1)對鼻咽癌細(xì)胞粘附分子E-cadherin和ICAM-1 表達(dá)的影響，探討LMP1在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)的機制。 【方法】 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測31例鼻咽粘膜慢性炎、32例鼻咽癌組織和24例鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中LMP1、E-cadherin和ICAM-1蛋白的表達(dá)。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和RT-PCR檢測E-cadherin和ICAM-1在體外培養(yǎng)的高分化鼻咽

2、癌細(xì)胞系CNE1、低分化鼻咽癌細(xì)胞系CNE2Z以及轉(zhuǎn)染了LMP1基因的CNE1細(xì)胞株——CNE1-GL 細(xì)胞中的表達(dá)。通過細(xì)胞平板克隆形成實驗來檢測LMP1對鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用細(xì)胞——細(xì)胞粘附實驗、細(xì)胞——基質(zhì)粘附實驗、劃痕實驗和細(xì)胞運動實驗檢測LMP1對細(xì)胞粘附和運動能力的影響。 【結(jié)果】 臨床病理標(biāo)本免疫組化結(jié)果顯示，鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中LMP1蛋白的陽性率分別為：22.6％、

3、62.5％和75％(P<0.01)：E-cadherin蛋白的陽性率分別為：100％、46.9％和29.2％(P<0.01)；ICAM-1蛋白陽性表達(dá)率分別為：25.8％、65.6％31 75％(P<0.01)。Spearman 相關(guān)分析顯示，在鼻咽癌組織和鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，LMP1 與 E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(鼻咽癌：r=0.353，P<0.05；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶：r=-0.502，P<0.05)；而在鼻咽癌組織和鼻咽

4、癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，LMP1與ICAM-1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(鼻咽癌：r=0.378，P<0.01；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶：r=0.735，P<0.01)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：LMP1蛋白在CNE1、CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞中的強陽性率分別為0、(86.27±3.45)％和(96.60±3.03)％(P<0.01)；E-cadherin 蛋白的強陽性率分別為(37.47±1.50)％、(29.00±1.20)％和(19.53±1.92)％(

5、P<0.01)：ICAM-1蛋白的強陽性率分別為(5.27±1.45)％、(80.80±3.70)％和(93.33±4.23)％ (P<0.01)。RT-PCR結(jié)果表明，與CNE1細(xì)胞相比較，CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞中E-cadherin的mRNA 表達(dá)明顯降低(P<0.01)，而ICAM-1的mRNA表達(dá)則明顯升高(P<0.01)。細(xì)胞克隆形成率結(jié)果：CNE1、CNE2Z和CNE1-GL各細(xì)胞的克隆形成率分別為(70.22±

6、3.02)％、(80.67±2.19)％和(86.22±1.50)％(P<0.05)。腫瘤細(xì)胞同質(zhì)粘附實驗顯示，CNE2Z和CNE1-GL 細(xì)胞的同質(zhì)粘附能力較CNE1細(xì)胞弱(P<0.05)。腫瘤細(xì)胞——基質(zhì)粘附實驗得出CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞的異質(zhì)粘附能力(平均光密度值分別為0.537±0.054和0.601±0.026)較CNE1細(xì)胞(平均光密度值為0.463±0.009)強的結(jié)果(P<0.01)。劃痕實驗結(jié)果：CNE2Z和C

7、NE1-GL細(xì)胞劃痕長滿的時間分別為21.110±0.697h和18.887±0.510h，與CNE1細(xì)胞(32.000±0.883h)相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。腫瘤細(xì)胞運動實驗結(jié)果顯示，CNE2Z和CNE1-GL細(xì)胞穿過PVPF膜的細(xì)胞數(shù)平均值分別為103.333±7.095和119.333±6.028，與CNE1細(xì)胞的平均值46.333±7.024相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 【結(jié)論】 在