功能蛋白的O-糖基化參與調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的遷移以及E-鈣粘蛋白的表達(dá).pdf

1、卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤，臨床上以手術(shù)和化學(xué)藥物治療為主，由于其發(fā)病隱匿，早期缺乏特異性的臨床癥狀和體征，約70％的病例確診時(shí)已屬晚期，并且存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且術(shù)后復(fù)發(fā)率高，5年存活率低。由此可見(jiàn)，尋找有效預(yù)防和抑制卵巢癌侵襲與轉(zhuǎn)移的分子靶點(diǎn)是臨床治療卵巢癌的關(guān)鍵所在。
　　O-GlcNAc糖基化是指在氧連接的β-N-乙酰葡萄糖胺基轉(zhuǎn)移酶(OGT)的催化作用下，在靶蛋白的絲/蘇氨酸殘基上添加一個(gè)N-乙酰葡萄糖胺。OGA是氧連接的β-N

2、-乙酰氨基葡萄糖苷酶，它可以催化水解糖蛋白上的0-糖鏈。已經(jīng)有研究表明，功能蛋白的O-GlcNAc糖基化在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展轉(zhuǎn)移侵襲過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，但是關(guān)于O-GlcNAc糖基化在卵巢癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用相關(guān)研究還未見(jiàn)報(bào)道。因此本課題構(gòu)建不同的卵巢癌細(xì)胞模型，以探究O-GlcNAc糖基化在卵巢癌細(xì)胞遷移過(guò)程中的作用及其分子機(jī)制。
　　在本研究中，我們首先觀察到高遷移性卵巢癌HO-8910PM細(xì)胞中OGT的mRNA以及O-Gl

3、cNAc糖基化水平均明顯高于低遷移性卵巢癌OVCAR3細(xì)胞，這提示:功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可能參與了卵巢癌細(xì)胞遷移的調(diào)控。PUGNAc/Thiamet G處理OVCAR3細(xì)胞12h，通過(guò)qPCR和western blot方法，我們檢測(cè)到OVCAR3細(xì)胞中蛋白的O-GlcNAc糖基化水平明顯升高;通過(guò)transwell-細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，我們觀察到OVCAR3細(xì)胞的遷移能力亦明顯增強(qiáng)。與此同時(shí)，采用干擾OGT基因的化學(xué)合成siRNA

4、轉(zhuǎn)染HO-8910PM細(xì)胞，其遷移能力明顯降低，與OGA抑制劑處理具有相同的生物學(xué)效應(yīng)。我們還發(fā)現(xiàn)，PUGNAc/Thiamet G處理OVCAR3細(xì)胞12h，OVCAR3細(xì)胞中E-鈣粘蛋白的表達(dá)明顯減少，E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復(fù)合物的結(jié)合能力亦明顯減弱;而采用干擾OGT基因的化學(xué)合成siRNA轉(zhuǎn)染HO-8910PM細(xì)胞，其E-鈣粘蛋白的表達(dá)明顯增加，E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復(fù)合物的結(jié)合能力亦明顯增強(qiáng);然而，β-連環(huán)蛋白和p120連環(huán)蛋白

5、的表達(dá)卻未發(fā)生明顯的改變。與此同時(shí)，我們還證實(shí)，在卵巢癌細(xì)胞中E-鈣粘蛋白、β-連環(huán)蛋白和p120連環(huán)蛋白是可以發(fā)生O-GlcNAc糖基化修飾的。綜上，研究結(jié)果提示功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可以促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移并抑制E-鈣粘蛋白的表達(dá)，并減弱E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復(fù)合物的相互結(jié)合。因此，我們推測(cè)功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可能是通過(guò)下調(diào)E-鈣粘蛋白的表達(dá)，降低E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復(fù)合物的結(jié)合能力，從而使細(xì)胞間的粘附能力降