Ad-p53對乳腺癌細胞凋亡及ER蛋白表達影響的研究.pdf

1、研究目的：
　　1.比較不同濃度Ad-p53處理后,兩種常用裂解液配方的蛋白提取效率。
　　2.研究Ad-p53對乳腺癌細胞ER表達的影響,分析不同濃度下ER表達的變化。
　　3.觀察Ad-p53對乳腺癌細胞凋亡的影響,分析不同濃度下細胞凋亡率的變化趨勢。
　　研究方法：
　　1.比較蛋白提取效率:用不同濃度Ad-p53處理MCF-7細胞48小時,分別使用碧云天公司RIPA裂解液(強)和RIPA裂解液(弱)

2、提取細胞蛋白,BCA測定蛋白濃度,進行比較。
　　2.篩選Ad-p53對ER誘導(dǎo)作用最強的濃度區(qū)間:不同濃度Ad-p53(10倍)處理MCF-7細胞,饑餓培養(yǎng)48小時后,westernblot檢測ER表達,選擇表達最多的濃度區(qū)間。
　　3.觀察Ad-p53誘導(dǎo)作用最強時ER表達的變化趨勢:在選擇好的濃度范圍,不同濃度Ad-p53處理MCF-7細胞,饑餓培養(yǎng)48小時,westernblot檢測ER及p53表達,獲得ER及p53

3、表達隨Ad-p53濃度變化的趨勢。
　　4.觀察不同處理時間ER表達的變化:使用與3相同濃度Ad-p53處理MCF-7細胞,但饑餓培養(yǎng)時間縮短為24小時,westernblot檢測ER表達,比較Ad-p53對ER表達的影響效果。
　　5.觀察不同濃度Ad-p53對細胞凋亡率的影響:使用與3相同濃度的Ad-p53處理MCF-7細胞,饑餓培養(yǎng)48小時,流式細胞術(shù)分析細胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度(0、10、

4、30、50、80、100MOI)Ad-p53處理后的MCF-7細胞,RIPA裂解液(強)對目的蛋白(ER、p53)的提取效率明顯高于RIPA裂解液(弱)。
　　2.大濃度梯度(0、1、10、100、1000、10000MOI)時,ER在10到100MOI時表達最多,0-10MOI表達增加,100-10000MOI表達持續(xù)減少。
　　3.在ER表達最活躍的濃度范圍(0、10、30、50、80、100MOI),p53隨著Ad-p

5、53濃度增加而增加,ER在0-80MOI表達增加,80-100明顯減少,80MOI時Ad-p53對ER表達的誘導(dǎo)作用最強,GAPDH和Actin得到相同結(jié)果。
　　4.繼續(xù)相同濃度(0、10、30、50、80、100MOI),ER仍在80MOI表現(xiàn)表達高峰,但是增加和減少的趨勢比48小時弱。
　　5.不同濃度Ad-p53濃度下,0-50MOI細胞早期凋亡和晚期凋亡均增加,50-100MOI早期凋亡增加趨勢降低,晚期凋亡減少。