Mammosphere低表達(dá)蛋白GIPC1干擾對MCF-7乳腺癌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、乳腺癌是最常見的惡性腫瘤之一。隨著腫瘤干細(xì)胞概念的提出,以及實(shí)體瘤中腫瘤干細(xì)胞的成功分離,人們越來越相信腫瘤干細(xì)胞是腫瘤的生長,惡化和轉(zhuǎn)移的內(nèi)在原因。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)利用乳腺癌細(xì)胞系MCF-7在體外培養(yǎng)出了mammosphere,并利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對mammosphere和MCF-7細(xì)胞進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究,共鑒定出34個具有表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn),其中GIPC1(G-protein signaling-GAIP-interacting p

2、rotein COOHterminus)蛋白在mammosphere中表達(dá)下調(diào)。
　　 GIPC1含有PDZ結(jié)構(gòu)域,是細(xì)胞中重要的支架蛋白,與蛋白質(zhì)的運(yùn)輸定位、膜受體蛋白的成簇、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及膜泡運(yùn)輸?shù)扔嘘P(guān)。為了研究GIPC1蛋白在細(xì)胞中的功能及其對mammosphere形態(tài)及生長的影響,實(shí)驗(yàn)利用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)干擾腫瘤干細(xì)胞mammosphere低表達(dá)蛋白GIPC1的表達(dá),并通過熒光顯微鏡觀察和免疫印跡對其驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)對穩(wěn)

3、定低表達(dá)細(xì)胞株和陰性對照細(xì)胞株進(jìn)行mammosphere培養(yǎng)觀察GIPC1的干擾后mammosphere的形態(tài)變化,結(jié)果顯示GIPC1的低表達(dá)并沒有引起mammosphere的形態(tài)學(xué)的明顯變化。為了研究GIPC1蛋白低表達(dá)對于MCF-7細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響,實(shí)驗(yàn)通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析共找到16個差異表達(dá)蛋白,利用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定出其中12個。包括與細(xì)胞骨架、糖代謝、核苷酸代謝、線粒體分裂相關(guān)蛋白、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白及干細(xì)胞分子