肉蓯蓉對豬體外培養(yǎng)胚胎早期發(fā)育影響效果的研究及其機理初步探討.pdf

1、為探討肉蓯蓉在對豬胚胎體外生長發(fā)育的影響效果，本研究以豬胚胎為實驗材料，設(shè)計三個試驗：肉蓯蓉水提液對豬胚胎早期發(fā)育體外培養(yǎng)效果的的篩選試驗；在不同時期添加肉蓯蓉水提液對豬胚胎早期體外發(fā)育的影響；肉蓯蓉水提液對豬早期體外發(fā)育胚胎中NO濃度含量的影響。以期為提高體外培養(yǎng)胚胎發(fā)育率和擴大中醫(yī)藥的應(yīng)用范圍開拓一條新的途徑。 試驗一：以NCSU-23+0.4％BSA基礎(chǔ)液為對照組，添加不同濃度肉蓯蓉水提液為試驗組，初步篩選出四個濃度后再進

2、一步篩選出最佳濃度。試驗結(jié)果：肉蓯蓉水提液的最佳濃度為50μg/ml,其卵裂率和囊胚率分別為85.12±2.9％和31±3.0％,顯著高于對照組的76.73±3.2％、24.89±4.3％,試驗各組之間無顯著性差異。結(jié)果表明：在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加肉蓯蓉水提液能有效促進胚胎體外生長發(fā)育。 試驗二：胚胎在不同發(fā)育時期所需營養(yǎng)物質(zhì)不同，為了能明確在胚胎發(fā)育的哪個時期加入肉蓯蓉水提液效果更好，本試驗在胚胎發(fā)育的三個時期加入肉蓯蓉，比較其在

3、何時期加入效果更好。試驗結(jié)果：在胚胎培養(yǎng)的2-4cell期添加肉蓯蓉水提液，其囊胚率達到48.72±6.6％，高于對照組囊胚率25.08±5.4％，兩者之間有極顯著差異。而且，也比在體外成熟階段(IVM)和胚胎培養(yǎng)(IVC)階段加入的效果要好，二者之間差異顯著。結(jié)果表明：在胚胎培養(yǎng)的2-4cell期添加肉蓯蓉能更有效的促進胚胎體外發(fā)育的能力。 試驗三：本試驗基于對NO前期研究的基礎(chǔ)上，對培養(yǎng)到囊胚階段的胚胎中NO含量進行了測定，

4、觀察添加中藥是否對胚胎NO含量產(chǎn)生影響。試驗結(jié)果：經(jīng)過體外培養(yǎng)到囊胚階段，胚胎細(xì)胞中NO含量均較高，對照組和試驗組分別為26.33±1.90和20.30±0.95。但添加肉蓯蓉水提液后其胚胎細(xì)胞中NO含量明顯降低，與對照組有顯著性差異。結(jié)果表明：肉蓯蓉的水提液在一定程度上清除了胚胎在體外培養(yǎng)過程中所產(chǎn)生的自由基，優(yōu)化了NO在細(xì)胞信號通路中的雙相調(diào)節(jié)作用，從而減少了NO的生成，提高了胚胎體外發(fā)育率。 以上結(jié)果說明：肉蓯蓉水提液對豬