蛋白二硫鍵異構(gòu)酶ERp57調(diào)控血小板活化和血栓形成的作用及其機制研究.pdf

1、研究背景和目的:越來越多的研究表明，蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulfideisomerase，PDI)家族主要成員PDI在血小板活化和血栓形成中發(fā)揮重要作用。ERp57也是PDI家族主要成員之一，與PDI具有很高的同源性。本課題的研究目的是明確ERp57在血小板功能和血栓形成過程中的生理作用，并揭示其作用的分子機制。
　　 研究方法:本課題綜合應(yīng)用ERp57重組蛋白，抗ERp57多克隆抗體、抗ERp57單克隆抗體和

2、血小板特異性ERp57基因敲除小鼠多種研究手段，從血小板生理功能，包括聚集、顆粒釋放、整合素αⅡbβ3的活化，體內(nèi)血栓形成和生理性止血三個方面，系統(tǒng)研究了ERp57在血小板活化，血栓形成和止血過程中的作用，同時研究了ERp57的調(diào)控機制。
　　 研究結(jié)果:(1)重組ERp57野生型蛋白促進膠原蛋白和SFLLRN誘導(dǎo)的血小板聚集，而無酶活性的重組ERp57突變型蛋白抑制血小板聚集;尾靜脈注入重組ERp57突變蛋白顯著延長小鼠出血時

3、間(7.66±1.74 v.s.18.20±2.90 min，與對照組相比，p＜0.05)。(2)抗ERp57多克隆抗體明顯抑制膠原蛋白和SFLLRN誘導(dǎo)的血小板聚集，并且抑制血小板整合素αⅡbβ3的活化和P-selectin在膜表面的表達;抗ERp57單克隆抗體(Mab1)明顯抑制鈣離子載體A23187誘導(dǎo)的血小板聚集，明顯延長小鼠出血時間(11.84±1.32 v.s.4.36±1.44 min，與IgG2a相比，p＜0.01)，并

4、且延長FeC13誘導(dǎo)的頸動脈閉塞時間(10.41±1.67 v.s.3.97±0.46 min，與IgG2a相比，p＜0.01)。(3)為確定ERp57在血小板活化和血栓形成中的生理作用，本課題應(yīng)用Cre-Loxp系統(tǒng)，建立了血小板特異性ERp57基因敲除小鼠模型(PF4-Cre/ERp57-/-)。研究結(jié)果表明，與正常小鼠(ERp57flox/flox)小鼠相比，血小板缺乏ERp57的小鼠(PF4-Cre/ERp57-/-)的出血時間

5、明顯延長(9.02±1.55 v.s.5.03±0.50 min，p＜0.05)，其由FeC13誘導(dǎo)的血栓形成能力明顯減弱(9.56±1.48 v.s.5.51±0.83 min，p＜0.05)。缺乏ERp57的血小板的整合素αⅡbβ3活化，α-顆粒釋放和聚集反應(yīng)均明顯減弱，更重要的是，重組ERp57蛋白呈濃度依賴性補償PF4-Cre/ERp57-/-血小板的聚集障礙。
　　 研究結(jié)論:本課題在世界上首次揭示ERp57具有重要的