海洛因通過Ca2+相關(guān)信號通路調(diào)節(jié)海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞中Calpain-1活性.pdf

1、目的：觀察海洛因成癮大鼠海馬組織和海馬體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中Calpain-1的表達(dá)，同時觀察海洛因?qū)ｑR星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體中鈣離子及AMPKα1的影響，探討Calpain-1在海洛因成癮中的中樞機(jī)制。
　　方法：建立海洛因成癮大鼠模型，隨機(jī)分為生理鹽水組（對照組）和海洛因依賴組（成癮組），Western blot檢測大鼠海馬組織中Calpain-1的表達(dá)水平;SD大鼠海馬原代細(xì)胞培養(yǎng)。Western blot和細(xì)胞免疫熒光

2、組織化學(xué)鑒定分離與培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞;海洛因處理體外分離培養(yǎng)的大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞，Western blot檢測細(xì)胞中Calpain-1、AMPKα1的表達(dá)水平；應(yīng)用熒光探針Fluo-3（綠色熒光）。
　　方法，激光共聚焦顯微鏡觀察海洛因、AICAR對海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)線粒體中Ca2+的影響。結(jié)果：1)Western blot檢測顯示，大鼠海馬組織中有低分子量的Calpian-1表達(dá)，分子量約為45kDa,；與對照組相比，成癮組海馬

3、組織中Calpain-1的表達(dá)總量和低分子量片段表達(dá)都明顯減少（P<0.01），且海洛因處理后星形膠質(zhì)細(xì)胞中Calpain-1的表達(dá)總量和低分子片段表達(dá)水平均低于對照組（P<0.01），海洛因組和AICAR組海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞AMPKα1 Thr172位點磷酸化的表達(dá)水平比對照組高，其 AMPKα1的表達(dá)水平也增高（P<0.01）；2)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，在培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中檢測到較強(qiáng)的GFAP紅色熒光，熒光主要集中在胞質(zhì)中，呈絲狀分

4、布；3)海洛因預(yù)處理后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體中 Ca2+濃度與對照組細(xì)胞比較明顯增高（P<0.05）； AICAR刺激海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞，與AICAR處理前2s比較,加入AICAR2s后海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體中Ca2+濃度顯著增加（P<0.05）。
　　結(jié)論:海洛因使AMPKα1 Thr172位點磷酸化從而激活A(yù)MPK，激活后的AMPK引起線粒體中Ca2+濃度增加；海洛因通過激活A(yù)MPK降低海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞中 Calpain-1的表