P-ERK參與調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后Nrf2信號(hào)通路表達(dá).pdf

1、目的:創(chuàng)傷性腦損傷伴隨著嚴(yán)重的一次直接損害和繼發(fā)的二次損害，二次損害中氧化應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致線粒體功能異常，脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）斷裂，蛋白質(zhì)過(guò)氧化，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等，進(jìn)一步加重神經(jīng)元凋亡，而星形膠質(zhì)細(xì)胞在抵抗氧化應(yīng)激的過(guò)程中起著重要的作用。核因子E2相關(guān)因子(Nucleus factor E2-relatedfactor，Nrf2)是內(nèi)源性啟動(dòng)抗氧化基因的重要信號(hào)通路，氧化應(yīng)激的條件下可調(diào)節(jié)二相解毒

2、酶如血紅素加氧酶(heme oxygenase，HO-1)，超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)等的生成，從而起到抵抗氧化應(yīng)激的作用。細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinases，ERK)信號(hào)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，分化的重要通路，其在細(xì)胞氧化應(yīng)激中也起著重要作用，但是其對(duì)于星形膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2信號(hào)通路的作用還不太明確。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中Nrf2信號(hào)通路主要通過(guò)在星形膠

3、質(zhì)細(xì)胞中激活，調(diào)節(jié)解毒酶的表達(dá)從而對(duì)神經(jīng)元起到保護(hù)作用。本研究在體外環(huán)境中探討星形膠質(zhì)細(xì)胞劃痕損傷后，活化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶即磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(Phosphorylation Extracellular signal-regulated kinases，P-ERK)是否參與了Nrf2信號(hào)通路調(diào)節(jié)。
　　研究方法:取昆明小鼠乳鼠大腦皮質(zhì)，進(jìn)行原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞融合后，用10ul移液管吸頭進(jìn)行細(xì)胞劃痕損傷實(shí)驗(yàn)。用Weste

4、rn Blot，免疫熒光檢測(cè)損傷后P-ERK，Nrf2，以及其下游蛋白HO-1的表達(dá)情況。并使用Nrf2激動(dòng)劑萊菔硫烷后，檢測(cè)HO-1表達(dá)。為了探討P-ERK在劃痕損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用，劃痕前在星形膠質(zhì)培養(yǎng)基中加入P-ERK抑制劑U0126，后用Western Blot和免疫熒光檢測(cè)P-ERK，Nrf2和HO-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:在未處理的空白對(duì)照組中Nrf2僅在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，劃痕損傷后Nrf2在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)

5、，星形膠質(zhì)細(xì)胞劃痕損傷后Nrf2信號(hào)通路活化。Western blot結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比HO-1在細(xì)胞劃痕損傷后6h，12h，24h，48h表達(dá)先增高后降低(P＜0.05)，與此同時(shí)細(xì)胞劃痕后ERK活化，P-ERK表達(dá)增加。免疫熒光與Western blot結(jié)果表明細(xì)胞劃痕前使用U0126處理后P-ERK表達(dá)與細(xì)胞劃痕組相比表達(dá)明顯降低(P＜0.05)，HO-1的表達(dá)量與單純損傷組相比明顯降低(P＜0.05)U0126抑制了細(xì)胞