糖尿病骨質疏松發(fā)病機制與滋陰補腎方藥的調節(jié)作用.pdf

1、該研究通過建立糖尿病性骨質疏松大鼠模型,制備晚期糖化終末產物多克隆抗體,檢測大鼠骨密度、骨組織中Ⅰ型膠原和晚期糖化終末產物的含量以及骨代謝相關的一些生化指標,對晚期糖化終末產物在糖尿病性骨質疏松發(fā)病中的作用做了進一步的探討,并以氨基胍為對照觀察滋陰補腎方藥對晚期糖化終末產物形成的抑制作用以期達到對糖尿病骨質疏松的防治作用. 方法:選用48只6月齡雌性SD大鼠,體重190~220克,隨機取出12只作為正常對照組(CG組),其余大鼠左下腹腔

2、注射鏈脲佐菌素(STZ)(劑量為40mg/Kg體重),72小時后測血糖,凡血糖≥13.8mmol/L的大鼠選入實驗,再隨機分為3組,分別為:病理模型組(DM組)、氨基肌組(AG組)、中藥治療組(HD組).以上四組正常飼料喂養(yǎng),正常對照組和病理組自由飲水.中藥治療組按人和動物間體表面積折算的等效劑量比值<'[4]>,每只大鼠3ml/大,中藥灌胃(含生藥1g/ml).AG治療組用稀釋成3﹪的AG溶液灌養(yǎng).在20~25℃室溫下,持續(xù)飼養(yǎng)12周

3、,并分別在6周和12周時檢測血糖、尿糖、體重一次.12周后禁食24小時收集尿液,股動脈放血處死,分離血清用于檢測血鈣、血磷、血堿性磷酸酶、骨鈣素等血生化指標,取左側勝骨干4﹪多聚甲醛中固定,用于骨 Ⅰ型膠原和糖化終未產物的免疫組化,取右側股骨和脛骨測定骨密度.在建模和用藥的同時,選用2只雌性新西蘭大白兔,用提前制備和純化的AGE-BSA配免疫佐劑分次注射,瓊脂糖雙擴實驗檢測抗體滴度,免疫6次后抗體滴度達到標準,頸動脈取血,飽和硫酸銨鹽沉

4、淀法純化抗體,用于晚期糖化終末產物的檢測.小結:1 應用高糖孵育BSA可制備具有特異熒光的晚期糖化終末產物(AGE),純化AGE-BSA免疫新西蘭大白兔可獲得特異性AGE抗體并可用于免疫組化法檢測骨AGE.2 探討并發(fā)現(xiàn)了AGE與骨質疏松的關系,長期高血糖可造成骨組織內AGE明顯增加,導致骨膠原含量降低,骨有機質減少,鈣沉積減少,骨密度降低,導致骨質疏松.3 氨基肌通過抑制骨內AGE的積聚,可減輕糖尿病大鼠骨質疏松,為擴大氨基肌的應用提