脫細胞SIS作為真皮替代物的實驗研究.pdf

1、目的:探討脫細胞SIS作為真皮替代物的可行性。 方法: 1、取自健康家豬的空腸，去除漿膜、肌層和黏膜，并采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL聯(lián)合脫細胞的方法處理制備脫細胞SIS。對其理化性能、組織學結構及微生物學進行檢測。 2、實驗室內以脫細胞SIS為真皮支架與人表皮細胞復合培養(yǎng)構建復合皮。通過MTT檢測、組織學觀察、免疫組化檢測及掃描電鏡觀察，了解細胞生長情況及復合皮結構。 3、SD大鼠背部形成全層皮膚缺損

2、創(chuàng)面。實驗組用脫細胞SIS作為真皮替代物與SD大鼠自體刃厚皮片進行復合移植修復創(chuàng)面；對照組單純以自體刃厚皮片進行移植修復創(chuàng)面。觀察兩組創(chuàng)面愈合的質量及組織學變化。 結果： 1、脫細胞SIS厚度約0.1cm，為半透明狀、黃白色、質地柔軟、彈性好的膜狀結構。脫細胞SIS內無細胞，具有多空隙的三維網(wǎng)狀空間結構。微生物學檢測無微生物污染。 2、人表皮細胞在脫細胞SIS上能黏附、生長，MTT法檢測結果，復合培養(yǎng)組與單純人表

3、皮細胞培養(yǎng)組在各時間點的A570值(OD值)無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。說明脫細胞SIS對人表皮細胞增殖無促進作用，但也無毒性作用，生物相容性好。HE染色和Masson染色組織學觀察，可見脫細胞SIS呈膠原網(wǎng)狀纖維結構，其內無細胞結構，脫細胞SIS表面有一層細胞結構。角蛋白免疫組化檢測證實脫細胞SIS表面生長的細胞是表皮細胞。掃描電鏡下可見脫細胞SIS上表皮細胞融合生長，透過細胞間隙可見其下的網(wǎng)狀結構的脫細胞SIS。 3、于術

4、后2、4、6周動態(tài)觀察，實驗組與對照組移植后均獲得了滿意的皮片成活率，兩組移植皮片在各時間點的成活率對比無統(tǒng)計學意義。術后4周及6周，與單純自體刃厚皮移植對照組比較，復合皮組植皮區(qū)收縮率均明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。復合皮組HE染色和Masson染色組織學觀察可見，術后2周，表皮下的真皮組織與SIS染色程度不一，明顯表現(xiàn)為兩層結構，兩者的膠原排列不同。脫細胞SIS內可見新生小血管長入，大量炎性細胞浸潤，有成纖維細胞由創(chuàng)面遷入

5、生長。術后4周，復合皮的表皮下仍然可見兩種不同表現(xiàn)的膠原纖維結構，仍然有大量炎性細胞浸潤，有大量成纖維細胞遷入，可見大量的新生血管。術后6周，復合皮下已經不能區(qū)分明顯的真皮組織及脫細胞SIS兩種膠原纖維結構，而是被同一性的膠原結構所取代；炎性細胞浸潤明顯減少，可見大量的新生血管及成纖維細胞。 結論： l、采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL 聯(lián)合脫細胞的方法處理制備脫細胞SIS，可以完全除去具有抗原成分的細胞；得到的脫細胞S