活性真皮替代物的制備與移植的實驗研究.pdf

1、目的： 制備殼聚糖-膠原-激光微孔豬脫細胞復(fù)合真皮基質(zhì)(Chitosan-Chollagen Laser Micropore Porcine acellular composite dermalmatrix，CCLMPADM)，并將成纖維細胞(Fibroblast，F(xiàn)b)引入其中，構(gòu)建含活性細胞成分的新型真皮替代物，用于全層皮膚缺損的修復(fù)研究，為進一步提高移植物性能打下基礎(chǔ)． 方法： 1．按不同比例將殼聚糖(1m

2、g/ml)、鼠尾膠原(3g/L)進行混合，并通過冷凍與干熱兩種方法制備殼聚糖-膠原膜(Chitosan-Collagenmembrane，CCM)，對CCM的物理性能以及生物相容性進行研究，來確定合適的CCM制備方法。 2．體外進一步完善皮膚種子細胞庫，對Fb培養(yǎng)方法與Ca2+對角質(zhì)形成細胞(HKC)的調(diào)控作用進行研究，并應(yīng)用鼠尾膠原構(gòu)建全層組織工程皮膚，為進一步的研究工作打下基礎(chǔ)。 3．體外構(gòu)建CCLMPADM，并將F

3、b引入其中，構(gòu)建活性CCLMPADM。36只SD大鼠作全層皮膚缺損模型，隨機分為3組，每組12只：①微孔豬脫細胞真皮基質(zhì)(Porcine acellular dermal matrix，PADM)組(對照Ⅰ組)：自體刃厚皮+微孔PADM；②CCLMPADM組(對照Ⅱ組)：自體刃厚皮+CCLMPADM；⑦活性CCLMPADM組(實驗組)：自體刃厚皮+活性CCLMPADM。進行全層皮膚缺損的修復(fù)，并對移植物成活情況、組織學(xué)進行觀察。

4、 結(jié)果： 1．干熱法制備支架為透明光滑膜片，機械強度較高。凍干法制得支架為乳白色半透明膜片，吸水率、保水率較高。相同干燥方法時，當(dāng)殼聚糖與膠原比例為8/2時，形成膜片機械強度達最大值。隨膠原含量的增加，保水率與吸水率逐漸增大。CCM相容性顯示，凍干法與干熱法成膜，人角質(zhì)形成細胞(Human Keratinocyte，HKC)的增殖率無顯著性差異；但凍干法成膜的Fb增殖率高于干熱法。相同制備方法，隨膠原含量的增加，F(xiàn)b與HKC的增

5、殖率顯著增高。包埋實驗顯示CCM組織相容性良好，隨膠原含量增加，材料降解速度加快。 2．成功建立胎兒HKC庫與胎兒Fb庫；改進的Fb培養(yǎng)方法具有培養(yǎng)周期短，細胞損傷小等特點；不同濃度的Ca2+對HKC的增殖與分化有不同作用；以鼠尾膠原作為載體，采用液氣平面培養(yǎng)，可成功構(gòu)建全層組織工程皮膚替代物。 3．成功構(gòu)建活性CCLMPADM，用于全層皮膚缺損修復(fù)，顯示愈合情況明顯優(yōu)于PADM組與CCLMPADM組。 結(jié)論：