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文檔簡介
1、研究目的:
了解深圳地區(qū)孕35-37周女性陰道無乳鏈球菌攜帶狀況、分離菌株血清型分布及其耐藥性,為臨床合理使用抗生素提供參考。采用進(jìn)行脈沖場凝膠電泳技術(shù)對無乳鏈球菌進(jìn)行基因分型,建立數(shù)據(jù)庫,以了解深圳地區(qū)無乳鏈球菌的分子流行病學(xué)特征。建立一種基于顏色判定的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法,快速準(zhǔn)確地檢測無乳鏈球菌。
方法:
收集2013年01月-10月北京大學(xué)深圳醫(yī)院產(chǎn)前門診孕35~37周女性患者陰道分泌物拭子,嚴(yán)格按照
2、《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版進(jìn)行無乳鏈球菌分離培養(yǎng)及鑒定,采用乳膠凝集法對分離得到的無乳鏈球菌進(jìn)行血清型鑒定,采用K-B法測定無乳鏈球菌對7種常用抗菌藥物的敏感性。采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)技術(shù)對菌株進(jìn)行基因型分析。針對無乳鏈球菌cfb基因設(shè)計環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法的引物,優(yōu)化反應(yīng)體系,建立環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測無乳鏈球菌方法,通過在反應(yīng)前預(yù)先將羥基萘酚藍(lán)加入反應(yīng)體系,實現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法結(jié)果的可視化判斷。
結(jié)果:
3、 共收集標(biāo)本1108例,分離鑒定得到無乳鏈球菌132株,分離率為12.0%。132株無乳鏈球菌中127株(96.2%)可被所用的血清分型試劑鑒定出明確的血清型,其中血清Ia型41株(31.1%),血清Ib型17株(12.9%),血清II型1株(0.8%),血清III型64株(48.5%),血清V型4株(3.0%),其余5株(3.8%)不能被鑒定為以上5個血清型。132株無乳鏈球菌對青霉素、萬古霉素、頭孢曲松三種抗菌藥物的敏感率均為10
4、0%;對四環(huán)素的耐藥率高達(dá)69.7%,紅霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐藥率分別為53.0%、46.2%、29.5%。對29株體外藥敏試驗表現(xiàn)為紅霉素耐藥和克林霉素敏感或中介的無乳鏈球菌加做D-試驗,其中11株陽性,陽性率8.3%。132株無乳鏈球菌經(jīng)SmaI酶切后其中114株可產(chǎn)生PFGE電泳圖譜,被分為7-12條條帶,大小在10-900Kb之間,圖譜間相似度低于35%,經(jīng)聚類分析可被分為2個大的分支。采用建立的可視化環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增方法
5、檢測無乳鏈球菌和非無乳鏈球菌,結(jié)果顯示僅加入無乳鏈球菌DNA的反應(yīng)管變?yōu)樘焖{(lán)色,可視結(jié)果與產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳成像檢測結(jié)果一致;該方法檢測無乳鏈球菌純培養(yǎng)物DNA的靈敏度為60pg/μl。
結(jié)論:
因不同地區(qū)、不同醫(yī)院的標(biāo)本采集部位、分離培養(yǎng)及鑒定方法等不盡相同,各地報道的孕婦陰道無乳鏈球菌攜帶率有一定差異。深圳地區(qū)流行的無乳鏈球菌主要為Ia,Ib,II,III,V5個血清型,以血清III型最多,其次為血清Ia型。無乳
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