hADSCs肝樣分化、標記及Caveolin-1在分化中的作用.pdf

1、終末期肝病是由多種急慢性肝病導致的臨床綜合征。應用干細胞再生產(chǎn)生正常肝細胞代謝功能的“肝臟組織”，進行體外支持或體內(nèi)植入，可以解決肝臟來源的疑難。
　　 脂肪間充質細胞(ADSCs)作為自體細胞移植的種子細胞在再生醫(yī)學中發(fā)揮著重要作用。由于能在體外培養(yǎng)穩(wěn)定擴增，并在體內(nèi)和體外分化成為肝細胞，ADSCs可以作為自體干細胞治療肝臟疾病的種子細胞。
　　 Caveolin-1(窖蛋白-1，Cav-1)是組成胞膜窖的主要功能蛋白

2、。由于在脂滴和新生細胞膜的形成以及肝再生的能量供應中發(fā)揮著重要作用，因此是Cav-1肝再生所必需的蛋白。然而，Cav-1是否參與并影響ADSCs向肝細胞分化這一過程尚不明確。
　　 目的：本論文以人脂肪間充質干細胞為實驗對象，利用生長因子聯(lián)合誘導技術建立肝樣細胞模型，通過檢測干細胞向肝樣細胞誘導過程中Cav-l蛋白的表達，初步探討Cav-1在肝樣細胞誘導分化過程中的作用及介導的相關信號途徑，旨在了解干細胞向肝細胞誘導分化的機制。

3、
　　 方法：l、分離、提取及培養(yǎng)人源脂肪間充質干細胞并鑒定其性質。2、通過HGF、bFGF、EGF和Dex聯(lián)合誘導，免疫熒光及RT-PCR方法對誘導細胞進行鑒定。3、體外MR評估自合成SPIO作為干細胞移植的MR活體內(nèi)示蹤的安全性和有效性。4、WesternBlot方法檢測不同誘導時期肝樣細胞中Cav-1、ER-α36及MAPK信號通路蛋白表達。
　　 結果：l、分離提取了hADSCs，通過性質的鑒定表明，提取的hAD

4、SCs較為原始，干性強，具有多項分化的能力。2、生長因子聯(lián)合誘導建立了肝細胞樣模型，發(fā)現(xiàn)隨誘導時間的延長，干性基因Oct4、Nanog表達量逐漸減少；ALB、CYPlAl、HNFlA、HNFlB等基因表達量逐漸增多；AFP表達先增高再降低。說明干細胞向肝樣細胞分化誘導成功。3、自合成SPIO對脂肪間充質干細胞標記，在25μg/mL濃度時細胞的增殖水平正常，且在MR檢測上具有顯著性差異。4、在hADSCs肝樣分化的過程中Cav-1蛋白和M