Caveolin-1在TGF-β1誘導哮喘ASMCs增殖中的作用及羅紅霉素的干預.pdf

1、微囊蛋白-1(caveolin-1)是細胞膜上信號轉(zhuǎn)導的調(diào)節(jié)中心，其將胞外信號傳遞至胞內(nèi)，進而影響細胞活動。近年的研究表明轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是哮喘發(fā)病過程中的關鍵介質(zhì)，有關TGF-β1與其受體結(jié)合后刺激氣道平滑肌細胞(ASMCs)增殖的信號轉(zhuǎn)導途徑的研究已有不少，但從caveolin-1水平研究其在TGF-β1誘導ASMCs增殖中的作用的報道則不多。具有抗炎作用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素羅紅霉素(RXM)在caveolin-1水

2、平影響ASMCs增殖的作用也鮮有報道。為了闡明caveolin-1在TGF-β1誘導ASMCs增殖中的機制，及RXM在caveolin-1水平影響ASMCs增殖的作用，我們從以下三個部分進行闡述。
　　第一部分 TGF-β1對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞增殖的影響
　　目的:探討TGF-β1對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞增殖的影響
　　方法:
　　復制大鼠慢性哮喘模型，在體外培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細胞。采用酶聯(lián)免疫(ELIS

3、A)法檢測對照組和哮喘組氣道平滑肌細胞上清的TGF-β1濃度;將大鼠氣道平滑肌細胞隨機均勻接種到96孔板:分別以1ng/ml、10ng/ml和100ng/mlTGF-β1刺激后采用CCK-8法檢測在不同濃度TGFβ1刺激后細胞的增殖情況。
　　結(jié)果:
　　檢測兩組細胞上清發(fā)現(xiàn)，哮喘組的TGF-β1濃度明顯高于對照組(p＜0.05)。哮喘組較對照組，細胞增殖明顯(p＜0.05)，不同濃度TGF-β1刺激細胞增殖時，10ng/m

4、l和100ng/mlTGF-β1刺激后細胞增殖較1ng/mlTGF-β1刺激后增殖明顯(p＜0.05)，而10ng/ml和100ng/mlTGF-β1刺激后細胞增殖無明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　與正常大鼠相比，哮喘大鼠氣道平滑肌細胞分泌TGF-β1明顯增多;TGF-β1在一定濃度范圍內(nèi)能刺激哮喘氣道平滑肌細胞增殖。
　　第二部分 Caveolin-1通過PI3K途徑在TGF-β1誘導哮喘大鼠ASMCs增

5、殖中的作用及羅紅霉素的干預
　　目的:探討caveolin-1通過PI3K途徑在TGF-β1誘導哮喘大鼠ASMCs增殖中的作用及羅紅霉素對其的干預。
　　方法:
　　1、分別用不同濃度的TGF-β1刺激大鼠氣道平滑肌細胞，各實驗組提取標本后，采用蛋白免疫印跡法(WB)檢測蛋白caveolin-1、Akt、p-Akt的表達情況。
　　2、將培養(yǎng)的氣道平滑肌細胞進行分組，實驗分為六組:①TGF-β1(10ng/ml)

6、組;②哮喘組;③正常對照組;④wortmannin+TGF-β1(10ng/ml)組;⑤β-CD(10mM)+TGF-β1(10ng/ml)組;⑥RXM(100μg/ml)+TGF-β1(10ng/ml)組。各實驗組提取標本后，采用蛋白免疫印跡法(WB)檢測蛋白caveolin-1、Akt、p-Akt的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1、與對照組比較，哮喘組氣道平滑肌細胞caveolin-1的表達量明顯減少(p＜0.05)，不同

7、濃度TGF-β1作用后，10ng/ml和100ng/mlTGF-β1組細胞中caveolin-1的表達量較1ng/mlTGF-β1組表達量明顯減少(p＜0.05)，而10ng/m1和100ng/mlTGF-β1兩組間無明顯差異(p＞0.05);與此同時，哮喘組氣道平滑肌細胞較對照組p-Akt的表達量明顯增加(p＜0.05)，10ng/ml和100ng/mlTGF-β1組細胞中p-Akt的表達量較1ng/mlTGF-β1組表達量明顯增加(

8、p＜0.05)，而10ng/ml和100ng/mlTGF-β1兩組間無明顯差異(p＞0.05)。
　　2、與對照組比較，哮喘組氣道平滑肌細胞caveolin-1的表達量明顯減少(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組caveolin-1表達量明顯減少(p＜0.05)，RXM干預組較TGF-β1(10ng/ml)組caveolin-1表達量明顯增加(p＜0.05);與此同時，哮喘組氣道平滑肌細胞較對照組p-Akt的

9、表達量明顯增加(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組p-Akt表達量明顯增加(p＜0.05)，β-CD干預組較TGF-β1(10ng/ml)組p-Akt表達量明顯增加(p＜0.05)，RXM干預組較TGF-β1(10ng/ml)組p-Akt表達量明顯減少(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　TGF-β1刺激氣道平滑肌增殖過程中能明顯抑制caveolin-1的表達，RXM可以上調(diào)caveolin-1的表達，進

10、而抑制p-Akt的表達。
　　第三部分 Caveolin-1對哮喘大鼠ASMCs胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　目的:探討caveolin-1對哮喘大鼠ASMCs胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　方法:
　　將培養(yǎng)的氣道平滑肌細胞進行分組，實驗分為六組:①TGF-β1(10ng/ml)組;②哮喘組;③對照組;④wortmannin+TGF-β1(10ng/ml)組;⑤β-CD(10mM)+TGF-β1(10ng/ml)組;⑥R

11、XM(100μg/ml)+TGF-β1(10ng/ml)組。各實驗組采用流式細胞儀檢測氣道平滑肌細胞胞內(nèi)鈣離子的濃度。
　　結(jié)果:
　　與對照組比較，哮喘組氣道平滑肌細胞胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加(p＜0.05)，TGF-β1(10ng/ml)組較哮喘組胞內(nèi)鈣離子濃度明顯增加(p＜0.05)，RXM干預組較TGF-β1(10ng/ml)組胞內(nèi)鈣離子濃度明顯減少(p＜0.05)，wortmannin干預組較TGF-β1(10ng/