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文檔簡介
1、目的:觀察成骨細胞不同生長階段caveolin-1表達的時程變化,并研究caveolin-1對成骨細胞MC3T3-E1增殖和分化功能的影響。
方法:MC3T3-E1細胞在含β-甘油磷酸鈉,抗壞血酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)18d,在細胞培養(yǎng)的不同時間(3,6,9,12,15,18 d),采用western blouing方法觀察caveolin-蛋白表達變化。采用經(jīng)western blotting法篩選并確證有效的RNA干擾質粒pGe
2、nesil-1.1-cav-1質粒下調caveolin-1表達后,觀察其對成骨細胞MC3T3-E1增殖和分化作用的影響:轉染后第3天測定細胞存活率(MTT法),分別在轉染后第3,6,9,12,15d測定細胞裂解液ALP活性(PNPP法)、培養(yǎng)上清骨鈣素濃度(ELISA)。
結果:caveolin-1蛋白隨MC3T3-E1細胞的分化,表達量逐漸降低(P<0.01)各處理組對增殖期MC3T3-E1細胞存活率無明顯影響(P>0.
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