連翹提取物（單體及單體最佳配比）對膿毒癥大鼠的療效評價.pdf

1、目的:
　　觀察連翹提取物（單體）對膿毒癥大鼠術后48h、72h及1周存活率的影響，初步篩選出最有效的前3種單體;引用單味中藥有效單體（組效-量效）配伍的理念，運用正交設計的研究方法，得出最佳組份及配比;觀察最佳配比對膿毒癥大鼠血清內毒素、腫瘤壞死因子-α、白介素1、白介素6等炎癥介質的影響及對凝血機制、肝腎功能等方面的影響。
　　方法:
　　(1)采用大鼠盲腸結扎穿孔(CLP)模型，術前12h禁食，不禁水，5％水合氯

2、醛麻醉(350-400mg/kg)腹腔麻醉，麻醉滿意后，前腹正中備皮，消毒腹部皮膚，于腹部正中做2.5cm切口，取出盲腸后，游離腸系膜和盲腸，距盲、回腸結合部約盲腸全長1/3處，4號手術縫線盡量回避血管結扎，于距結扎處遠端約0.8-1cm處回避血管，三棱針(2.6×65mm)貫穿孔，3×30mm膠條貫穿盲腸留滯，放回腹腔，縫合切口。術后頸部皮下補液10mL，補充術中液體流失，抗休克;(2)分三個梯度（20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇）

3、分別對連翹進行提取，得到三種對應的連翹粗提取物后，分別予大鼠給藥，觀測大鼠48h、72h及1周的存活情況，選擇對膿毒癥大鼠最有效的連翹粗提取物，并以此實驗結果為基礎，對有效的連翹粗提取物進行進一步的單體提取，提純連翹提取物混合成份中含量最多的4種成份，用連翹提取物混合成分中含量最多的4中成份分別進行動物實驗，通過尾靜脈注射給藥的方法，觀察各單體對膿毒癥大鼠48h及72h的死亡率及生存時間的影響，初步篩選出對治療膿毒癥大鼠有效的單體;（3

4、)對篩選出治療膿毒癥大鼠有效的單體，通過動物實驗，運用正交設計，得出對膿毒癥大鼠有治療作用的3種單體的（組效-量效）關系，尋找最佳配比;(4)采用化學鑒別、核磁共振氫譜(1H-NMR)、核磁共振碳譜（13C-NMR）、薄層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)等光譜色譜方法對所分離出的四個化合物進行結構鑒定，確定化合物的結構和名稱（主要由天津藥物研究院完成）;(5)通過動物實驗，運用酶聯免疫法及檢驗，研究連翹有效單體最佳配比對膿毒癥大

5、鼠術后24h、48h、72小時TNF-α、IL-1β、LPS、IL-6，血常規(guī)，肝腎功能，凝血機制的影響。
　　結果:
　　(1)50％連翹粗提取物對膿毒癥有很好的治療作用，能夠在一定程度上降低膿毒癥大鼠的死亡率，并相對延長膿毒癥大鼠的生存時間;(2)記錄9種不同產地連翹的指紋圖譜;(3)分離出的四種化合物由鑒定可得出，一個木脂素類（連翹苷）、一個苯乙醇苷類（連翹酯苷A）、兩個黃酮類（蘆丁和槲皮素），連翹苷、連翹酯苷A及槲皮

6、素均能降低膿毒癥大鼠術后48h、72h及1周的死亡率，并相對延長膿毒癥大鼠的生存時間;(4)單體連翹苷、連翹酯苷A及槲皮素在治療膿毒癥大鼠模型中的最佳配比為2∶3∶3;(5)在膿毒癥病程的早期，連翹提取物能夠拮抗機體炎癥介質釋放，活白細胞及凝血系統(tǒng)來阻止病原微生物（如細菌）的進一步擴散。
　　結論:
　　(1)50％連翹粗提取物對膿毒癥大鼠有一定的治療作用，能夠在一定程度上降低膿毒癥大鼠的死亡率，并相對延長膿毒癥大鼠的生存時