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文檔簡介
1、鼠疫耶爾森氏菌是鼠疫的病原體,曾引發(fā)三次鼠疫世界大流行。鼠疫菌與宿主巨噬細胞的相互作用是其致病機制的重要環(huán)節(jié)。本研究試圖通過研究鼠疫耶爾森氏菌與巨噬細胞之間的蛋白相互作用進一步深入了解鼠疫菌的致病機制。我們首先建立和優(yōu)化了蛋白芯片篩選鼠疫菌與巨噬細胞相互作用的方法,用包含149個鼠疫菌毒力相關蛋白的蛋白芯片篩選出17個能與巨噬細胞蛋白相互作用的鼠疫菌蛋白。其中除LcrG、YscW和YscB為鼠疫菌重要毒力因子低鈣響應元件的成員、katY
2、為過氧化物歧化酶外,其余蛋白為推測的原噬菌體基因編碼蛋白或推測的未知功能蛋白。間接免疫熒光結果顯示8個芯片反應中信號最強的蛋白LcrG,YscB,YscW,VpPCP1.06,YpMT1.25ac,YpMT1.24c,YPO2090,YPO2108均能與巨噬細胞相互作用,初步證實篩選結果比較可靠性。利用噬菌體重組技術構建相應蛋白表達缺陷的鼠疫菌突變株,分析突變株對巨噬細胞的細胞毒性和在BALB/c小鼠中的LD50,發(fā)現(xiàn)兩者的突變株在小鼠
3、模型中的毒力顯著下降,表明鼠疫菌LcrG和YscB蛋白在其致病機制中有非常重要的作用。利用細菌雙雜交技術以鼠疫菌LcrG和YscW蛋白為誘餌蛋白篩選巨噬細胞J774A.1的cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)LcrG在巨噬細胞內作用的靶蛋白為Rpl39和Txn2,YscW作用的靶蛋白為Rnf149。Trx-2和Rnf149分別為硫氧還原蛋白和RING結構泛素連接酶相關的蛋白,它們在細胞的正常生理活動中發(fā)揮重要的作用,與細胞的免疫響應、信號轉導等緊密相關。
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