2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis,以下簡稱鼠疫菌)是一種烈性病原體,通過蚤的叮咬可以引發(fā)宿主動物間以及人間的鼠疫爆發(fā)流行,了解鼠疫菌的致病機制才能夠有效的防治鼠疫的爆發(fā)流行。密度感應(yīng)(quorum sensing,QS)系統(tǒng)是一種細(xì)胞密度依賴的胞間信號傳遞系統(tǒng),通過這種機制菌群可以同步調(diào)動大量基因的表達(dá),體現(xiàn)出有組織的類似于多細(xì)胞生物的群體性行為。根據(jù)其他細(xì)菌QS系統(tǒng)的研究結(jié)果,該系統(tǒng)可能與鼠疫菌的致病機制相

2、關(guān),因而對于鼠疫菌的QS系統(tǒng)進(jìn)行研究將有助于對該菌致病機制的理解。 方法: [1]QS系統(tǒng)信號分子檢測鑒定:利用QS系統(tǒng)Ⅰ型信號分子報告菌根癌農(nóng)桿菌NTL4(pZLR4)(Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4))與Ⅱ型信號分子報告菌哈氏弧菌BB170(Vibrio harveyi BB 170)對鼠疫菌是否產(chǎn)生信號分子進(jìn)行定性檢測,進(jìn)而利用HPLC-MS-MS對鼠疫菌培養(yǎng)上清中存在的Ⅰ

3、型信號分子進(jìn)行鑒定,并確定鼠疫菌Ⅰ型QS系統(tǒng)內(nèi)部存在的兩種信號分子合成酶各自對應(yīng)的合成產(chǎn)物; [2]QS系統(tǒng)效期范圍與內(nèi)調(diào)控分析:從宏觀角度,利用報告菌NTL4與BBl70,對鼠疫菌野生株及QS系統(tǒng)系列突變株Ⅰ型信號分子與Ⅱ型信號分子的生成規(guī)律進(jìn)行分析,從而明確Ⅰ型與Ⅱ型QS系統(tǒng)的效期范圍與相關(guān)性,同時預(yù)測Ⅰ型內(nèi)部兩套調(diào)控元之間的內(nèi)調(diào)控關(guān)系; [3]Ⅰ型QS系統(tǒng)與多細(xì)胞性的相關(guān)性:從表型方面,對鼠疫菌野生株與QS系統(tǒng)系列

4、突變株在LB富養(yǎng)培養(yǎng)基與TMH貧養(yǎng)培養(yǎng)基中的多細(xì)胞性(multicellularity)形成狀態(tài)與生成量進(jìn)行系統(tǒng)分析,從而對Ⅰ型系統(tǒng)內(nèi)部兩套調(diào)控元與多細(xì)胞性形成的相關(guān)性進(jìn)行分析; [4]Ⅰ型QS系統(tǒng)比較蛋白質(zhì)組分析:從微觀角度,使用雙向電泳技術(shù),對鼠疫菌Ⅰ型QS系統(tǒng)進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組分析,揭示Ⅰ型QS系統(tǒng)與鼠疫菌在高密度條件下存活與毒力的相關(guān)性。 結(jié)果: [1]QS系統(tǒng)信號分子檢測鑒定:定性檢測的結(jié)果與基因預(yù)測一致

5、,鼠疫菌中同時存在Ⅰ型與Ⅱ型QS系統(tǒng),經(jīng)HPLC-MS-MS鑒定,鼠疫菌所合成的Ⅰ型信號分子共有四種,即C6-HSL,C8-HSL,3-oxo-C6-HSL,3-oxo-C8-HSL,其中信號分子合成酶YpeI負(fù)責(zé)合成3-oxo-C6-HSL,信號分子合成酶YspI負(fù)責(zé)合成C6-HSL,C8-HSL,3-oxo-C6-HSL,3-oxo-C8-HSL,此外沒有其它的Ⅰ型信號分子合成酶存在; [2]QS系統(tǒng)效期范圍與內(nèi)調(diào)控分析:經(jīng)

6、報告菌的半定量分析,鼠疫菌Ⅰ型信號分子的效期范圍是從對數(shù)前期直至靜止晚期,其頂峰出現(xiàn)在進(jìn)入靜止期后約2-3h,并持續(xù)約10h才會逐漸減弱;鼠疫菌Ⅱ型信號分子的效期范圍是從對數(shù)前期至靜止期,其頂峰出現(xiàn)在對數(shù)中晚期,在靜止期到來之前徹底消失;鼠疫菌的自身生長狀態(tài)實現(xiàn)了其在不同時期對于Ⅰ型QS系統(tǒng)與Ⅱ型QS系統(tǒng)的選擇;此外,經(jīng)分析預(yù)測在鼠疫菌Ⅰ型QS系統(tǒng)內(nèi)部存在自調(diào)控現(xiàn)象,即ypel/ypeR與yspl/yspR兩套調(diào)控元內(nèi)部均存在負(fù)調(diào)控回路

7、,與此同時ypel/ypeR調(diào)控元在功能上位于上游,對yspI/yspR調(diào)控元具有負(fù)調(diào)控作用; [3]Ⅰ型QS系統(tǒng)與多細(xì)胞性的相關(guān)性:經(jīng)過對鼠疫菌多細(xì)胞性的形成狀態(tài)與生成量的表型分析,發(fā)現(xiàn)QS系統(tǒng)與多細(xì)胞性的形成直接相關(guān),ypeI/ypeR調(diào)控元的控制發(fā)揮著決定作用;[4]QS系統(tǒng)比較蛋白質(zhì)組分析:經(jīng)比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析,Ⅰ型OS系統(tǒng)對于鼠疫菌的自我保護(hù)、能源運輸、能量代謝具有明顯的上調(diào)控作用,并以此增強鼠疫菌在靜止期高密度狀態(tài)下

8、的生存能力,可能由此間接提高了鼠疫菌的毒力,而未發(fā)現(xiàn)對鼠疫菌已知毒力因子的顯著上調(diào)作用。 結(jié)論: 對鼠疫菌OS系統(tǒng)進(jìn)行了檢測、鑒定、作用規(guī)律分析與內(nèi)調(diào)控分析;并利用表型分析對該系統(tǒng)的內(nèi)調(diào)控規(guī)律予以補充;在此基礎(chǔ)上,最終利用比較蛋白質(zhì)組學(xué)對Ⅰ型QS系統(tǒng)的調(diào)控功能進(jìn)行了分析;結(jié)果顯示,Ⅰ型QS系統(tǒng)對于鼠疫菌的自我保護(hù)、能源運輸、能量代謝具有明顯的上調(diào)控作用,并以此增強鼠疫菌在高密度狀態(tài)下的生存能力,可能間接提高鼠疫菌的毒力,

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