Fas介導(dǎo)的肝癌細(xì)胞激活的T淋巴細(xì)胞凋亡的雙重阻斷研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)部分:第一部分可溶性Fas阻斷T細(xì)胞表面Fas L體外制備肝癌特異CTL:通過阻斷介導(dǎo)T細(xì)胞凋亡,可望建立快速大量激活制備腫瘤特異性CTL方法,并提高抗腫瘤效果.實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),用肝癌手術(shù)切除標(biāo)本制備腫瘤特異性CTL過程中,應(yīng)用可溶性Fas雙重阻斷激活T細(xì)胞間誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡和表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞對免疫細(xì)胞反攻擊誘導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡.可望短時(shí)間獲得大量腫瘤特異的激活T細(xì)胞.進(jìn)一步觀察阻斷Fas介導(dǎo)T細(xì)胞抗腫瘤免疫活性.觀察肝細(xì)胞

2、表面FasL被封閉后對CTL殺傷敏感性變化,可望為腫瘤免疫治療研究提供新策略.第二部分體外制備和雙重阻斷后肝癌特異性CTL體外凋亡作用和細(xì)胞殺傷活性變化:流式細(xì)胞術(shù)儀檢測未阻斷組較阻斷組和靜息淋巴細(xì)胞組凋亡率明顯升高,未阻斷組凋亡率達(dá)57.33±0.13﹪,靜息T淋巴細(xì)胞組1.22±0.25﹪,阻斷組細(xì)胞為13.12±0.26﹪.(P<0.01),DNA ladder顯示未阻斷組T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)明顯梯狀條帶,阻斷組為陰性.<'51>Cr釋

3、放法表明阻斷后T淋巴細(xì)胞殺傷活性加大,較未阻斷組及靜息淋巴細(xì)胞組差異明顯(P<0.01).<'3>H摻入法檢測證實(shí)可溶性Fas受體阻斷激活T細(xì)胞凋亡后,細(xì)胞增殖明顯升高,較未阻斷組存在明顯差異(P<0.01).體外實(shí)驗(yàn)確實(shí)獲得大量激活T細(xì)胞,T細(xì)胞可安全有效殺傷腫瘤細(xì)胞,這可望為肝癌過繼免疫治療研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和新策略.第三部分可溶性Fas及可溶性Fas阻斷后CTL的體內(nèi)毒性觀察:體內(nèi)研究的結(jié)果表明,在SCID小鼠人肝癌模型的實(shí)驗(yàn)性治療