吲哚胺2，3-雙加氧酶在T淋巴細(xì)胞對肝癌細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答中的作用.pdf

1、目的:肝癌患者的免疫系統(tǒng)不能有效地清除或殺傷癌細(xì)胞，是導(dǎo)致肝癌難以治愈、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要因素之一。探索肝癌細(xì)胞免疫逃逸的機制，將為肝癌的治療提供新的思路。吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)是肝臟以外唯一可催化色氨酸分子氧化裂解的限速酶，在哺乳動物的組織和細(xì)胞中廣泛表達(dá)。它通過降解局部組織中的色氨酸，在誘發(fā)宿主免疫防御、抑制T淋巴細(xì)胞免疫和抗腫瘤免疫、誘導(dǎo)母胎免疫耐受和移植物免疫耐受中均發(fā)揮重要的代謝性免疫調(diào)節(jié)作用。本研究通過觀察IDO在抗

2、肝癌免疫應(yīng)答中的作用，為臨床治療肝癌提供新的理論依據(jù)。 方法:從健康人的外周血中分離出T淋巴細(xì)胞和HepG2細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)，分為對照組和實驗組進(jìn)行比較，對照組為空白組，實驗組中分別加入IDO的抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)和外源性IDO；用RT-PCR檢測每組中細(xì)胞IDOmRNA的表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀分析混合反應(yīng)體系中HepG2細(xì)胞的凋亡率，四噻唑藍(lán)(MTT)實驗檢測混合反應(yīng)體系中T淋巴細(xì)胞抗HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。

3、 結(jié)果: 1.單獨培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，不表達(dá)IDOmRNA，而單獨培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞表達(dá)微量的IDOmRNA；混合培養(yǎng)后，HepG2細(xì)胞表達(dá)IDOmRNA，而且表達(dá)水平較單獨培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞高，其表達(dá)水平隨著1-MT濃度的增高而降低，而隨著外源性IDO濃度的增高而無明顯變化。 2.流式細(xì)胞儀分析混合反應(yīng)體系中HepG2細(xì)胞的凋亡率，對照組中HepG2細(xì)胞的早期凋亡率為(3.48±0.34)％，1-MT組(濃度分別為1

4、.25 mmol/l，2.5 mmol/l，5mmol/l)中分別為(7.82±0.41)％，(18.62±0.42)％，(25.32±0.40)％，加入1-MT組的HepG2細(xì)胞的早期凋亡率明顯高于對照組，四者比較有顯著性差異(P＜0.01)；外源性IDO組(濃度分別為0.05 mmol/l，0.5 mmol/l，5mmol/l)中分別為(3.32±0.35)％，(3.46±0.40)％，(2.75±0.26)％，只有當(dāng)外源性IDO濃

5、度為5mmol/l時HepG2細(xì)胞早期凋亡率與對照組比較才有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 3.MTT實驗顯示，對照組中T淋巴細(xì)胞抗HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性為(17.36±1.24)％，1-MT組(濃度分別為1.25 mmol/l，2.5 mmol/1，5mmol/1)中分別為(25.48±1.48)％、(32.89±1.73)％、(42.04±2.16)％，四者比較有顯著性差異(P＜0.01)，并且T淋巴細(xì)胞抗HepG2細(xì)胞的

6、細(xì)胞毒活性隨著1-MT濃度的增高而升高；外源性IDO組(濃度分別為0.05 mmol/l，0.5 mmol/l，5mmol/l)中分別為(17.30±0.52)％，(17.48±1.08)％，(15.74±0.79)％，同樣也是只有當(dāng)外源性IDO濃度為5mmol/l時與對照組比較才有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論: HepG2細(xì)胞表達(dá)的內(nèi)源性IDO和一定濃度的外源性IDO均可抑制外周T淋巴細(xì)胞發(fā)揮抗HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性