PKB介導(dǎo)的bFGF對肝癌細(xì)胞凋亡抑制蛋白Survivin活性的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PKB介導(dǎo)的bFGF對肝癌細(xì)胞凋亡抑制蛋白Survivin活性的影響姓名：孫波申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫黎光20040401過P 1 3 K 抑制劑w o r t m a n n i n 阻斷P K B 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以觀察凋亡抑制蛋白S u r v i v i nm R N A 的變化。證實S u r v i v i n 的表達(dá)依賴于P 1 3 K ／P K B 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從

2、而為S u r v i v i n 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究奠定理論基礎(chǔ)，并為腫瘤的治療提供一種新的策略。方 法本實驗應(yīng)用培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株B e l 一7 4 0 2 ，檢測b F G F 及w o r t m a n n i n 作用后，B e l 一7 4 0 2 細(xì)胞的凋亡情況及S u r v i v i n 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。將細(xì)胞分組后，對細(xì)胞施加處理因素，收集實驗及對照組細(xì)胞，分別用w e s t e r nb l o t 方法檢

3、測B e l - 7 4 0 2 中P K B 活性的變化、用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖和凋亡的變化、R T —P C R 檢測s u r v i v i nm R N A 的表達(dá)情況。結(jié) 果隨著b F G F 濃度的升高，P K B 的活性明顯升高，當(dāng)b F G F 濃度為2 5n g ／r n l 時，P K B 的活性達(dá)到峰值；以2 5 n g ／m lb F G F 與B e l - 7 4 0 2 細(xì)胞共同孵育5 、1 0 、3

4、0 、6 0 r a i n 。胞液的P K B 活性5 m i n 時開始升高，為對照組的1 ．8 2 倍。b F G F 作用1 0 m i n 時，胞液的P K B 活性升高最明顯，為對照組的2 ．8 1 倍( P< 0 ．0 5 ) ，其后P K B 活性開始下降，6 0 r a i n 時降至對照組的1 ．2 3 倍。R T —P C R 顯示，隨著b F G F 作用時間的延長，s u r v i v i nm R N

5、 A 的表達(dá)水平明顯升高，1 0 n g ／m lb F G F 作用時間為1 6h 時，s u r v i v i nm R N A 的表達(dá)水平達(dá)到峰值，為對照組的7 ．8 6 倍( P < 0 ．0 5 ) 。加入抑制劑w o r t m a n n i n 后，P K B 的活性和s u r v i v i nm R N A 的表達(dá)水平明顯受抑制( P < 0 ．0 5 ) ，其抑制程度與w o r t m a n n

6、 i n 濃度劑量有關(guān)系。表明H 3 K 抑制劑w o r t m a n n i n 能阻斷b F G F 對P K B 的活性和s u r v i v i nm R N A 的表達(dá)水平的促進作用，P K B 途徑是影響b F G F 對細(xì)胞s u r v i v i nm R N A 的表達(dá)水平的通路之一。流式細(xì)胞術(shù)分析，B e l 一7 4 0 2 細(xì)胞經(jīng)b F G F 孵育后，與對照組比G l 期細(xì)胞減少，S 期細(xì)胞增多，但w