SARS-CoV實驗滅活疫苗免疫效果評價及體外抗SARS-CoV藥物研究.pdf

1、　　目的：評價SARS-CoV實驗滅活疫苗在小動物(兔)體內(nèi)的免疫效力和安全性,制備高效價兔抗SARS-CoV血清,以及尋找有效的抗SARS-CoV藥物。
　　方法：將滅活SARS-CoV全病毒配伍弗氏佐劑免疫SPF級新西蘭兔。免疫后,每隔一周耳靜脈取血,分離血清,間接ELISA法檢測血清中特異性IgG抗體,病毒中和試驗檢測血清中和抗體,蛋白芯片檢測SARS-CoV不同重組蛋白抗原(S1、S2、S3、S4、N、M、3CL)結(jié)合抗血

2、清能力；HE染色檢測免疫后兔部分組織的病理變化；辛酸-硫酸銨鹽析及DEAE離子交換層析分離、純化兔抗血清。與此同時,開展植物藥體外抗病毒活性篩選。
　　結(jié)果：SARS-CoV實驗滅活疫苗免疫后,兔體內(nèi)能快速產(chǎn)生特異性IgG抗體和中和抗體,且產(chǎn)生的抗體能在體內(nèi)維持較長時間；抗體水平呈現(xiàn)規(guī)律性變化,IgG抗體效價和中和抗體效價最高分別可達1：25600和1：2560以上。但是全病毒不同蛋白抗原引起的抗體水平有所差別,S2蛋白最強。免疫

3、后,兔肺組織出現(xiàn)病毒間質(zhì)性肺炎病理變化,與SARS患者肺部病理變化相似,其它組織沒有明顯的病理變化。兔抗血清經(jīng)分離、純化后,得到純度達90%以上的特異性IgG抗體,活性損失較少。體外抗病毒活性篩選出千金藤素和美國葡萄柚種子提取物都具有良好的抗SARS冠狀病毒活性,其治療作用的IC50分別為6.00μg/mL和1：50000。
　　結(jié)論：血清學(xué)試驗和病理學(xué)試驗為SARS滅活疫苗進入靈長類動物及臨床試驗提供技術(shù)支持并儲備物質(zhì)基礎(chǔ)；體外