組蛋白修飾相關(guān)基因在iPSC及結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞中表達(dá)的初步研究.pdf

1、研究目的
　　 檢測(cè)組蛋白修飾相關(guān)基因在iPSC(誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞)和人類(lèi)胚胎干細(xì)胞(hES)中的mRNA表達(dá)譜，以篩選在從成體細(xì)胞到iPSC的轉(zhuǎn)變過(guò)程中可能較重要的組蛋白修飾相關(guān)基因，并進(jìn)一步檢測(cè)其在結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞中的表達(dá)情況，以尋找潛在的新型惡性腫瘤預(yù)警及干預(yù)標(biāo)志物。
　　 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
　　 將人類(lèi)包皮成纖維細(xì)胞，人類(lèi)iPSC，hES細(xì)胞系H9于相同標(biāo)準(zhǔn)化條件下培養(yǎng)，提取總RNA，通過(guò)定量realtim

2、eRT-PCR的手段檢測(cè)58個(gè)組蛋白修飾相關(guān)基因的mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)有3個(gè)基因在iPSC和hES細(xì)胞中都明顯升高(>5倍改變)，分別為Jarid2、KMT5C和PRMT8；有3個(gè)基因在iPSC和hES細(xì)胞中都明顯降低(>5倍改變)，分別為Mina、Phf2和KMT7。推測(cè)這6個(gè)在組蛋白修飾相關(guān)基因在iPSC的轉(zhuǎn)變過(guò)程中有可能起到關(guān)鍵作用，并在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢歸納這些基因的背景及功能。
　　 在結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480中，

3、我通過(guò)克隆球培養(yǎng)得到腫瘤干細(xì)胞較為富集的樣本，以定量realtimeRT-PCR的手段檢測(cè)上述6個(gè)組蛋白相關(guān)基因的mRNA在正常腸粘膜組織，細(xì)胞系及克隆球之間的表達(dá)差異。發(fā)現(xiàn)Jarid2，Mina，Phf2這3個(gè)基因在正常腸粘膜組織，SW480和SW480-sphere中表達(dá)未見(jiàn)明顯差異，無(wú)明顯升高或降低趨勢(shì)(變化<2倍)。KMT5C在SW480細(xì)胞系中輕度升高1.7倍(p<0.05)，而在克隆球中升高至3.3倍(p<0.05)。而KM

4、T7則在SW480細(xì)胞系中升高3.1倍(p<0.05)，而在克隆球中升高不明顯，為1.7倍(p<0.05)?？煽闯鲚^明顯變化趨勢(shì)的為PRMT8，其在SW480細(xì)胞系中輕度升高1.6倍(p<0.05)，而在克隆球中升高達(dá)7倍(p<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 挑選的58個(gè)重要組蛋白修飾相關(guān)基因在人類(lèi)iPSC與hES細(xì)胞中具有相似的mRNA表達(dá)譜。Jarid2、KMT5C、PRMT8、Mina、Phf2和KMT7這6個(gè)基因