組蛋白修飾相關基因在iPSC及結腸腫瘤干細胞中表達的初步研究.pdf

1、研究目的
　　 檢測組蛋白修飾相關基因在iPSC(誘導性多能干細胞)和人類胚胎干細胞(hES)中的mRNA表達譜，以篩選在從成體細胞到iPSC的轉變過程中可能較重要的組蛋白修飾相關基因，并進一步檢測其在結腸癌腫瘤干細胞中的表達情況，以尋找潛在的新型惡性腫瘤預警及干預標志物。
　　 實驗方法及結果
　　 將人類包皮成纖維細胞，人類iPSC，hES細胞系H9于相同標準化條件下培養(yǎng)，提取總RNA，通過定量realtim

2、eRT-PCR的手段檢測58個組蛋白修飾相關基因的mRNA表達，發(fā)現有3個基因在iPSC和hES細胞中都明顯升高(>5倍改變)，分別為Jarid2、KMT5C和PRMT8；有3個基因在iPSC和hES細胞中都明顯降低(>5倍改變)，分別為Mina、Phf2和KMT7。推測這6個在組蛋白修飾相關基因在iPSC的轉變過程中有可能起到關鍵作用，并在GenBank數據庫中查詢歸納這些基因的背景及功能。
　　 在結腸癌細胞系SW480中，

3、我通過克隆球培養(yǎng)得到腫瘤干細胞較為富集的樣本，以定量realtimeRT-PCR的手段檢測上述6個組蛋白相關基因的mRNA在正常腸粘膜組織，細胞系及克隆球之間的表達差異。發(fā)現Jarid2，Mina，Phf2這3個基因在正常腸粘膜組織，SW480和SW480-sphere中表達未見明顯差異，無明顯升高或降低趨勢(變化<2倍)。KMT5C在SW480細胞系中輕度升高1.7倍(p<0.05)，而在克隆球中升高至3.3倍(p<0.05)。而KM

4、T7則在SW480細胞系中升高3.1倍(p<0.05)，而在克隆球中升高不明顯，為1.7倍(p<0.05)。可看出較明顯變化趨勢的為PRMT8，其在SW480細胞系中輕度升高1.6倍(p<0.05)，而在克隆球中升高達7倍(p<0.05)。
　　 結論
　　 挑選的58個重要組蛋白修飾相關基因在人類iPSC與hES細胞中具有相似的mRNA表達譜。Jarid2、KMT5C、PRMT8、Mina、Phf2和KMT7這6個基因