布氏桿菌LPS抗原及其單克隆抗體的制備與純化.pdf

1、布氏桿菌(Brucella Blues)是革蘭氏陰性需氧桿菌，可引起人畜共患的布氏桿菌病，給世界各國畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)也給人類健康造成極大的危害。該病目前尚不能完全根治，所以預(yù)防和檢測顯得尤為重要。
　　本研究采用改良熱酚法制備純化布氏桿菌M5株的脂多糖（LPS），檢測細(xì)菌LPS免疫原性；純化的細(xì)菌LPS免疫BALB/c小鼠，通過DOT-ELISA測定血清抗體效價(jià)。結(jié)果表明采用熱酚法能獲得較高純度的細(xì)菌LPS，其免疫

2、原性較高，DOT-ELISA檢測的血清效價(jià)達(dá)到1:106，與全菌免疫原性接近。
　　在此基礎(chǔ)之上，將LPS免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，制備雜交瘤細(xì)胞，采用間接ELISA法進(jìn)行陽性篩選，經(jīng)過三次篩選和3-4次細(xì)胞克隆化培養(yǎng)，獲得四株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株，采用間接ELISA法分別測定其細(xì)胞上清抗體效價(jià)，分別達(dá)到1:104，1:105，1:105，1:105。對四株細(xì)胞的上清液進(jìn)行Tricine-SDS-

3、PAGE鑒定，上清中同時(shí)出現(xiàn)了細(xì)胞培養(yǎng)液中沒有的蛋白，即為單克隆抗體目的蛋白。測定單克隆抗體的相對親和力和穩(wěn)定性，結(jié)果顯示其相對親和力分別為24.13μg/mL，24.65μg/mL，24.95μg/mL，23.16μg/mL，且具有良好的穩(wěn)定性。對細(xì)胞上清采用硫酸銨鹽析法初步純化，再采用親和層析法對單抗進(jìn)一步純化，純化的蛋白進(jìn)行效價(jià)測定和Tricine-SDS-PAGE鑒定，結(jié)果表明純化后四株細(xì)胞的單抗效價(jià)略有降低，但仍可達(dá)1:104