熱休克蛋白47在病理性瘢痕生成中的作用機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景對(duì)于病理性瘢痕的研究一直是整形外科乃至整個(gè)外科界的焦點(diǎn)，由于其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今為止仍無(wú)明確的病因?qū)W診斷，也沒有一種普遍有效的治療方法。大量研究結(jié)果表明，膠原蛋白的異常合成與沉積是許多纖維化反應(yīng)疾病的病理基礎(chǔ)，同時(shí)也是病理性瘢痕形成的重要原因。 熱休克蛋白47(heatshockprotein，HSP47)是一種分子量為47KD的熱休克蛋白，屬于小分子量HSP家族。HSP47存在于膠原蛋白分泌細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)內(nèi)，

2、與前膠原特異性結(jié)合，參與前膠原的折疊、裝配、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程，被認(rèn)為是膠原特異性分子伴侶，在膠原合成及纖維化病理過程中發(fā)揮著重要作用。國(guó)外有多項(xiàng)研究證實(shí)，抑制HSP47的表達(dá)，可抑制膠原合成，減弱纖維化程度。如在腎小球腎炎大鼠模型以及大鼠切口愈合實(shí)驗(yàn)中，局部注入HSP47反義寡核苷酸，可有效減輕了腎小球硬化的程度，并可抑制切口愈合的瘢痕形成反應(yīng)。 隨著基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，使得基因治療成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域全新的治療手段，這樣，對(duì)于病理

3、性瘢痕的基因治療研究也就成為目前整形外科界研究的熱點(diǎn)問題，也是從根本上治療病理性瘢痕的手段。 研究方法本研究應(yīng)用RNA干擾、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、質(zhì)粒構(gòu)建、免疫組織化學(xué)染色、天狼星紅偏振光顯色、HP比色法及Westernblot等技術(shù)，在比較研究病理性瘢痕與正常皮膚組織中HSP47基因功能狀態(tài)差異的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)并構(gòu)建含有特異性干擾HSP47mRNA片段的質(zhì)粒，分析比較在選擇性沉默HSP47基因表達(dá)前后，瘢痕疙瘩原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞中

4、與膠原蛋白合成及分泌相關(guān)的機(jī)能狀況的改變。 研究結(jié)果通過組織學(xué)染色及熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)，與正常皮膚相比，HSP47在病理性瘢痕中呈現(xiàn)異常增高的表達(dá)狀態(tài)，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；并且與膠原蛋白的沉積量呈現(xiàn)正向相關(guān)關(guān)系(r=0.386，P＜0.05)。經(jīng)HSP47siRNA表達(dá)載體特異性沉默瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中HSP47基因表達(dá)后，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白的合成以及細(xì)胞外膠原蛋白的分泌均明顯受到抑制。 研究結(jié)論在

5、病理性瘢痕的生成過程中，成纖維細(xì)胞內(nèi)HSP47基因過度表達(dá)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生超出常量的mRNA并翻譯為HSP47蛋白，正是由于大量的HSP47蛋白聚集于成纖維細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，就使得前膠原的折疊、裝配、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程異常加快和增多，從而導(dǎo)致膠原蛋白的合成及分泌量明顯增加，這樣，過多的膠原蛋白過度的儲(chǔ)留于皮膚真皮層中，造成了真皮層膠原基質(zhì)異常增生并最終形成瘢痕疙瘩。HSP47基因高表達(dá)促進(jìn)瘢痕疙瘩生成這一機(jī)制的闡明，為我們提供了抑制瘢痕疙瘩形成的