DAPT抑制Notch信號(hào)通路對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移瘤RM-1細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的：
　　1、以小鼠前列腺癌細(xì)胞株RM-1細(xì)胞為研究對(duì)象，利用γ-分泌酶抑制劑DAPT抑制細(xì)胞Notch信號(hào)通路，觀察其對(duì)RM-1細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響。
　　2、構(gòu)建前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的動(dòng)物模型，探討生理狀態(tài)下DAPT對(duì)轉(zhuǎn)移性骨腫瘤生長(zhǎng)及化療敏感性的影響。
　　方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)組以不同濃度DAPT（0.25、0.5、1、2、5μmol/L）處理RM-1細(xì)胞后，利用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)觀察其對(duì)RM-1

2、細(xì)胞增殖、周期的影響，Tunel法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，RT-PCR、Western blot方法分析細(xì)胞中Notch1、Jagged1表達(dá)的變化；不同濃度阿霉素（1、2、4、6、8、10μg/ml）單用或聯(lián)用DAPT（1μmol/L）處理RM-1細(xì)胞，利用MTT法比較單用或聯(lián)用DAPT時(shí)阿霉素對(duì)RM-1細(xì)胞的半抑制率IC50值。
　　2、采用左脛骨近端髓腔注射RM-1細(xì)胞方法建立前列腺癌骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型，3周后利用X線、三維CT重建、HE

3、染色等方法評(píng)價(jià)模型；并將模型隨機(jī)分為空白對(duì)照組、DAPT組、阿霉素組、阿霉素聯(lián)用DAPT組，各組予對(duì)應(yīng)處理4周后，處死小鼠并剝離腫瘤組織稱濕重。
　　結(jié)果：
　　1、與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組中0.25μmol/L DAPT組對(duì)RM-1細(xì)胞增殖、周期、凋亡、以及Notch1、Jagged1表達(dá)均無(wú)明顯影響（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)組中0.5、1、2、5μmol/L DAPT組均能明顯抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞G0/G1期阻滯、促進(jìn)凋亡以及

4、下調(diào)Notch1、Jagged1表達(dá)（P<0.05），且呈劑量依賴性。阿霉素單用時(shí)IC50值為(6.25±0.38)μg/ml，阿霉素聯(lián)用DAPT時(shí)IC50值為(3.25±0.52)μg/ml。
　　2、左脛骨髓腔注射RM-1細(xì)胞3周后，X線、三維CT重建顯示骨質(zhì)破壞；解剖后見(jiàn)左脛骨近端骨質(zhì)疏松，局部有“魚肉”樣組織突出髓腔，并與脛骨周圍肌肉組織粘連，浸潤(rùn)擴(kuò)散，界限模糊；HE染色提示未分化上皮細(xì)胞，細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞核大小不一，深

5、染，染色質(zhì)數(shù)目不均，僅見(jiàn)極少腺樣結(jié)構(gòu)。經(jīng)不同處理因素腹腔注射4周后，稱量腫瘤組織濕重，對(duì)照組、DAPT組、阿霉素組、阿霉素聯(lián)用DAPT組分別為（3.45±0.22）g、（3.21±0.37）g、（2.87±0.28）g、（2.25±0.41）g，各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），其中DAPT組與對(duì)照組比較具有明顯差異（P<0.01），阿霉素聯(lián)用DAPT組與阿霉素組比較具有明顯差異（P<0.01）。
　　結(jié)論：
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