骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌血管生成擬態(tài)的影響及前列腺癌骨轉(zhuǎn)移相關機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.研究人骨髓間充質(zhì)干細胞對人前列腺癌PC-3細胞系及22RV1細胞系增殖，遷移，侵襲及血管生成擬態(tài)等生物學特性的影響，并初步探討其影響血管生成擬態(tài)過程中的相關分子機制；
　　2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細胞株中分選人前列腺癌類干細胞，并鑒定其相應生物學特性；
　　3.探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的配體羅格列酮對前列腺癌PC-3細胞系增殖，遷移，侵襲及血管生成擬態(tài)的影響，并初步探

2、討其相關分子機制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細胞系及22RV1細胞系，應用CCK-8法觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng)，觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)形成的影響。通過裸鼠皮下成瘤實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對

3、前列腺癌細胞體內(nèi)成瘤及血管生成擬態(tài)形成的影響。人骨髓間充質(zhì)干細胞干預前列腺癌細胞后通過RT-PCR及western blot等方法觀察其CXCR4的表達變化，并通過CXCR4抑制劑AMD3100、PI3K抑制劑LY294002及慢病毒介導的RNA干擾技術研究SDF-1/CXCR4軸及PI3K/Akt通路在該過程中的作用；
　　2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細胞株中分選出CD133+/CD44+細胞，通過免疫組化、流式細胞術

4、、CCK8及平板克隆形成實驗鑒定其表面標志物表達情況及腫瘤干細胞相關特性，通過裸鼠皮下成瘤實驗研究分選前后細胞體內(nèi)成瘤能力；
　　3.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細胞系，應用CCK-8法觀察羅格列酮不同濃度和不同作用時間對前列腺癌PC-3細胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察羅格列酮對PC-3細胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng)，觀察羅格列酮對PC-3細胞血管生成擬態(tài)形成和VEGF產(chǎn)生的影響；并通過RT

5、-PCR及western blot等方法觀察研究VEGF及PI3K/Akt通路在該過程中的作用。
　　結(jié)果：
　　1.人骨髓間充質(zhì)干細胞可促進前列腺癌PC-3細胞增殖、遷移及侵襲；前列腺癌PC-3細胞和22RV1細胞在體外三維培養(yǎng)條件下能夠形成形成環(huán)狀和網(wǎng)絡樣結(jié)構。骨髓間充質(zhì)干細胞可在體外實驗及裸鼠體內(nèi)試驗中可促進前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)的形成。人骨髓間充質(zhì)干細胞上調(diào)了兩種前列腺癌細胞系CXCR4的表達，慢病毒介導的RNA干

6、擾技術抑制CXCR4表達后可抑制兩種細胞血管生成擬態(tài)形成。CXCR4抑制劑AMD3100和PI3K抑制劑LY294002可阻斷人骨髓間充質(zhì)干細胞或SDF-1誘導的血管生成擬態(tài)形成；
　　2.經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細胞比例為0.50％；免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素α2β1均高表達；其細胞增殖和克隆形成率高于PC-3細胞；以低密度注射時，其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC-3細胞；
　　3.羅

7、格列酮可明顯抑制前列腺癌PC-3細胞增殖、遷移及侵襲。同時羅格列酮可抑制前列腺癌PC-3細胞在體外三維培養(yǎng)條件下形成環(huán)狀和網(wǎng)絡樣結(jié)構，并抑制其VEGF mRNA表達及蛋白水平分泌。羅格列酮能夠抑制PC-3細胞Akt磷酸化。
　　結(jié)論：
　　1.人骨髓間充質(zhì)干細胞可促進前列腺癌細胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；人骨髓間充質(zhì)干細胞促進前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過上調(diào)其CXCR4表達并激活PI3K/Akt通路起作用