喜炎平注射液中有效成分在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布研究.pdf

1、喜炎平注射液由穿心蓮內(nèi)酯磺化物加工制成，為江西青峰藥業(yè)有限公司獨(dú)家品種，具有清熱解毒，止咳止痢之功效。臨床用于支氣管炎、扁桃體炎、細(xì)菌性痢疾等。17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯和17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉是喜炎平注射液的主要活性成分，在喜炎平注射液中的含量均為0.8mg/mL左右。體外實(shí)驗(yàn)顯示17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯和17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉有抗菌、抗病毒、抗炎活性。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究喜炎平注射液的

2、文獻(xiàn)較多，但有關(guān)喜炎平注射液以及其有效成分的藥代動(dòng)力學(xué)方面的研究目前尚無(wú)報(bào)道。
　　目的:分別建立測(cè)定大鼠生物樣品中17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯和17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉濃度的液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法。運(yùn)用該方法研究靜脈注射喜炎平注射液中有效成分17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯單體注射液和17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉單體注射液后的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布規(guī)律，為臨床合理用藥和新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。
　

3、　方法:測(cè)定生物樣品中17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯的濃度，采用己烯雌酚為內(nèi)標(biāo)，樣品前處理選用甲醇有機(jī)溶劑直接沉淀法，用在線過(guò)濾器和ZorbaxSB-C18(2.1×150mm I.D.，1.8μm粒徑)進(jìn)行色譜分離，以水相（含5mmol乙酸銨）和有機(jī)相（乙腈）為流動(dòng)相，采用梯度洗脫法，15％有機(jī)相(0min)→15-80％有機(jī)相(3.5min)→80-15％有機(jī)相(0.1min)→15％有機(jī)相(1.4min)。流速:0.4mL/min，

4、進(jìn)樣體積:5μ L。質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)采用ESI源（電噴霧化離子源），通過(guò)負(fù)離子檢測(cè)方式，在MRM（多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)）模式下，17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯和己烯雌酚的定量離子對(duì)分別為m/z349.1→m/z286.9和m/z267.1→m/z236.9。
　　測(cè)定生物樣品中17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉的濃度，采用亞硫酸氫鈉穿心蓮內(nèi)酯為內(nèi)標(biāo)，樣品前處理選用甲醇有機(jī)溶劑直接沉淀法，用在線過(guò)濾器和沃特世ACQUITY UPLCTM

5、 BEH-C18(2.1×150mm，1.7μm)進(jìn)行色譜分離，以水相（含5mmol乙酸銨）和有機(jī)相（乙腈）為流動(dòng)相，采用梯度洗脫法，1％有機(jī)相(0 min)→1％有機(jī)相(2.0 min)→1-70％有機(jī)相(1.0 min)→70％有機(jī)相(3.0min)。流速:0.4mL/min，進(jìn)樣體積:5μL。質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)采用ESI源（電噴霧化離子源），通過(guò)負(fù)離子檢測(cè)方式，在MRM（多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)）模式下，17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉

6、和亞硫酸氫鈉穿心蓮內(nèi)酯的定量離子對(duì)分別為m/z428.9→m/z96.0和m/z413.0→m/z79.9。
　　取大鼠血漿或組織勻漿，加入一定體積的甲醇和內(nèi)標(biāo)溶液，旋渦混勻后離心，吸取上清液，過(guò)濾后進(jìn)樣。選用SD大鼠經(jīng)尾靜脈注射給藥后于不同時(shí)間點(diǎn)眼眶取血，且采集大鼠的各臟器組織，應(yīng)用本研究建立的分析方法測(cè)定血藥濃度和各臟器組織中藥物濃度，并計(jì)算相關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，探討該藥在體內(nèi)的代謝規(guī)律。同時(shí)比較各組織中藥物濃度，探討該藥注射給

7、藥后在大鼠體內(nèi)的分布情況。
　　結(jié)果:在上述方法下，生物樣品中被測(cè)藥物的峰形良好。17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯的最低檢測(cè)限為0.1 ng/mL，最低定量限為0.5ng/mL。線性范圍為0.5-300ng/mL，R2均大于等于0.9974，日內(nèi)、日間精密度RSD均小于7％，準(zhǔn)確度在80-115％之間，回收率在80-110％之間。大鼠尾靜脈注射(5mg/kg)17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯單體注射液，將測(cè)得的血漿樣品數(shù)據(jù)用Das3.0進(jìn)

8、行處理，得到藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，Cmax:765.8±40.5ng/mL，Tmax:5.8±2.0min，t1/2α:7.1±2.5min，t1/2β:27.5±15.1min, AUC0-t:942.3±476.6ng·h/mL, AUC0-∞:1018.2±484.7ng·h/mL。組織分布迅速而廣泛，給藥5min后，藥物濃度以腎臟中最高，其次是心、肝、肺、大腸、脾、胃。大腸在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都有一定濃度的分布。
　　17-氫-9-去氫

9、穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉的最低檢測(cè)限為0.1ng/mL，最低定量限為0.5ng/mL。線性范圍為0.5-1000ng/mL，R2均大于等于0.9840，日內(nèi)、日間精密度RSD均小于5％，準(zhǔn)確度在78-100％之間，回收率在80-105％之間。大鼠尾靜脈注射(5mg/kg)17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉單體注射液，將測(cè)得的血漿樣品數(shù)據(jù)用Das3.0進(jìn)行處理，得到藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，Cmax:5019.2±1046.9ng/mL

10、, Tma）:5.0±1.0min, t1/2α:6.0±2.5min,t1/2β:18.1±9.4min,AUC0-t:4669.4±1968.6ng·h/mL，AUC0-∞:5300.8±1772.7ng·h/mL。組織分布迅速而廣泛，給藥5min后，藥物濃度以腎臟中最高，其次是大腸、肝、肺、心、脾、胃。腎、大腸在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)都有一定濃度的分布。
　　結(jié)論:本研究分別建立了測(cè)定大鼠血漿和組織器官中17-氫-9-去氫穿心蓮內(nèi)酯和1