抗腫瘤活性化合物靈芝酸T高效制備方法的研究.pdf

1、靈芝是一味名貴的中草藥，在東亞地區(qū)有著數(shù)千年的藥用歷史。靈芝酸被證明是靈芝中一類主要的活性化合物，其具有抑制腫瘤成長和抗腫瘤轉移等重要藥理活性。隨著靈芝菌絲體深層發(fā)酵技術及兩階段靜置培養(yǎng)技術發(fā)展，原材料的供應已得到緩解，然而缺乏相對應的靈芝酸高效分離制備技術依舊阻礙并制約了對其深度藥物研究和開發(fā)。目前，國內外尚未見關于高效、低成本特定靈芝酸單體制備工藝的報道，其主要難點在于特定靈芝酸在靈芝中的含量少、在色譜分離中分離度低、峰疊加情況嚴重

2、。本學位論文利用兩階段靜置培養(yǎng)技術得到靈芝菌絲體為材料探究了抗腫瘤活性化合物靈芝酸T的高效分離制備的策略，并建立了一套低成本、高得率、高純度的靈芝酸T生產(chǎn)工藝模型。
　　本文從二階段培養(yǎng)法生產(chǎn)的靈芝菌絲體中發(fā)現(xiàn)、分離并鑒定出一種新的靈芝酸化合物，根據(jù)習慣命名法將其稱為7-乙氧基靈芝酸O。其在菌絲體內的含量為1.2-1.5 g/100 g干菌絲，為其他已鑒定靈芝酸的5-10倍，未見有更高含量的靈芝酸發(fā)現(xiàn)的報道。實驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)該

3、靈芝酸可以通過酸解反應轉化成靈芝酸T，因此可以作為靈芝酸T生產(chǎn)的前導化合物。
　　7-乙氧基靈芝酸O對于pH，高溫及極性溶劑均不穩(wěn)定，因此穩(wěn)定性是分離制備該化合物中的核心問題。穩(wěn)定性實驗表明：7-乙氧基靈芝酸O在中性，非極性溶劑中穩(wěn)定性最佳。通過實驗分析，我們計算了7-乙氧基靈芝酸O在常用溶劑中40℃下的降解反應常數(shù)，并測算出其在甲醇，酸化甲醇（pH=5.1）及含水甲醇（20％含水量）的降解活化能分別為105.8±3.3 kJ/m

4、ol，38.2±3.6 kJ/mol，及103.2±2.4 kJ/mol?；谝陨辖Y論，我們設計由7-乙氧基靈芝酸O正相色譜分離，結晶提純和酸解組成的高純度靈芝酸T間接制備工藝。
　　同類物雜質的分離是天然產(chǎn)物及發(fā)酵產(chǎn)物制備的一大難題。在本文中，通過分析靈芝菌絲體內靈芝酸結構相關性，我們建立了一套針對靈芝酸T的預處理工藝，酸解-乙酰化-酸解。該策略可將大部分原本需要丟棄的靈芝酸轉化為靈芝酸T，如7-乙氧基靈芝酸O和靈芝酸Mk，因此

5、大大簡化了粗提液中靈芝酸的種類，降低了后期分離純化步驟的難度。經(jīng)處理后，靈芝酸T在粗提液中的質量含量及與雜質的最小分離度分別從0.44 g/100 g干菌絲和1.05提升至1.69 g/100 g干菌絲和7.90，提升幅度分別約為4倍和7倍。將可轉化為靈芝酸T的組分計入靈芝酸T的初始含量，整個預處理過程中靈芝酸T的回收率在90%左右。在實驗室規(guī)模（78.5 mL柱體積）下，該方法便可將95%純度的靈芝酸含量提升至每天2.9克。該策略解決