缺氧-復氧對大鼠血管平滑肌細胞ACE2基因表達的影響.pdf

1、目的：研究短期缺氧/復氧對大鼠血管平滑肌細胞ACE2基因表達的影響。 方法：無菌條件下取出SD大鼠的胸主動脈，留取胸主動脈中膜的血管平滑肌細胞，運用組織貼塊法純化、培養(yǎng)，采用第4-7代細胞進行實驗，進行實驗前用含有1％血清的DMEM培養(yǎng)基靜止血管平滑肌細胞24小時。利用玻璃干燥缸自制缺氧裝置，并檢測其缺氧效果。然后建立體外血管平滑肌細胞的缺氧方案，不同時間點通過倒置顯微鏡觀察血管平滑肌細胞的形態(tài)學變化、死亡細胞記數(shù)等指標，以此判

2、斷缺氧刺激對體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞活性的影響。最后提取血管平滑肌細胞的總RNA，應用逆轉錄一聚合酶鏈反應法(RT-PCR)進行半定量分析，以α-Actin為內對照，研究血管平滑肌細胞在缺氧24小時內不同時間點及缺氧24小時后復氧不同時間點ACE2mRNA的表達變化。 結果： 1、運用組織貼塊法成功培養(yǎng)原代細胞，培養(yǎng)的血管平滑肌細胞呈典型的“峰一谷”樣生長，可滿足本實驗的需要。 2、自制的缺氧裝置24小時內氧分壓

3、明顯降低且PH值波動不明顯。對體外細胞實施缺氧方案后，24小時內未見明顯的細胞腫大、漂浮和壞死現(xiàn)象。缺氧組與正常對照組相比較二者差異無顯著性(P>0.05)。 3、RT-PCR結果的半定量分析表明與正常對照組相比，血管平滑肌細胞ACE2mRNA表達在缺氧后4小時、8小時時逐漸下降；但是隨著缺氧時間的延長，缺氧16小時時ACE2基因的表達水平逐漸增高，缺氧24小時時ACE2基因的表達水平顯著增高(P<0.01)；缺氧24小時復氧4