抗氧化低密度脂蛋白抗體在動脈粥樣硬化中的臨床及實驗研究.pdf

1、目的 關于動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)發(fā)病機理的研究，有越來越多的證據(jù)表明AS的發(fā)生、發(fā)展過程中，炎癥反應擔當著重要的作用，它貫穿疾病發(fā)生的始終。其中單核/巨噬細胞、T淋巴細胞及肥大細胞等炎癥細胞也是人體主要的免疫細胞，因此免疫和炎癥必然密不可分，免疫機制在AS中的相關研究業(yè)因此成為了AS研究中的新熱點。研究表明自身免疫在AS的病理過程中發(fā)揮著極為重要的作用，包括熱休克蛋白、C-反應蛋白及眾多的修飾后脂蛋

2、白都可以誘發(fā)自身抗體的生成。 氧化低密度脂蛋白(Oxidizedlowdensitylipoprotein，OX-LDL)最初因為其較低密度脂蛋白(Lowdensitylipoprotein，LDL)有更強的致泡沫細胞作用及細胞毒性，成為AS研究的熱點。后繼的研究發(fā)現(xiàn)，LDL在氧化過程中伴隨著一系列的脂質及蛋白的分解和重新組合過程，產生了新的表位，具有類似異體蛋白的免疫源性，能夠誘發(fā)自身抗體。已有的臨床及實驗研究發(fā)現(xiàn)抗OX-LD

3、L抗體和AS的關系密切，但是其在AS中的具體機制仍然不清楚。 該研究從臨床、動物實驗及細胞研究三方面對抗氧化低密度脂蛋白抗體在AS發(fā)病過程中可能發(fā)揮的作用機制進行了探討： 1.觀察臨床冠心病患者外周血抗OX-LDL水平與其臨床表現(xiàn)的關系，探討自身抗體在臨床工作中的實踐意義； 2.通過AS實驗動物模型，觀察斑塊病變內免疫復合物的出現(xiàn)時間和局部分布特征，并給予辛伐他汀干預后觀察其對免疫復合物影響。希望以此來進一步探討

4、免疫復合物與AS形成的關系及辛伐他汀可能存在的免疫調節(jié)作用； 3.通過體外細胞實驗，觀察抗OX-LDL抗體干預對OX-LDL與單核細胞相互作用的影響，探討免疫復合物參與泡沫細胞形成的可能機制。 方法 1.以2002年12月—2003年6月住院治療的冠心病患者共38例為觀察對象，依據(jù)臨床表現(xiàn)將其分為穩(wěn)定性心絞痛(Stableanginapectoris，SAP)、不穩(wěn)定性心絞痛(Unstableanginapect

5、oris，UAP)、急性心肌梗死(Acutemyocardiuminfarction，AMI)3組，另有13例無冠心病及主要危險因子的患者作為對照組(Controlgroup，CON)，留取其血漿標本，以酶聯(lián)免疫吸附測定方法(Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)測定外周血抗OX-LDL抗體(IgG)水平。利用冠狀動脈造影技術(CoronaryAngiography，CAG)，對患者的冠脈狹窄程度進行

6、半定量測定。其他資料，通過臨床工作及常規(guī)生化檢查獲得。 2.將34只純種新西蘭大白兔分為對照組，高脂組，辛伐他汀預防組及辛伐他汀治療組，分兩階段造模：半數(shù)的對照組、高脂組以及辛伐他汀預防組在8周；另一半的對照組、高脂組及辛伐他汀治療組在第14周處死，取其主動脈標本，利用HE染色分析血管結構改變及斑塊的生成發(fā)展情況。免疫組織化學技術分析AS斑塊病變內免疫復合物的沉積及其類型以及辛伐他汀干預對免疫復合物形成的影響。 3.U9

7、37細胞和新西蘭大白兔外周血單核細胞，經(jīng)OX-LDL(人，10mg/L)及抗OX-LDL抗體(兔抗人，5mg/L)2個因素組合共分為對照組、OX-LDL刺激組、OX-LDL+抗OX-LDL抗體共孵育組及單純抗OX-LDL抗體組4組，共培養(yǎng)24小時后，利用半定量RT-PCR技術分析CD36、CD40、MMP-9的mRNA表達量。 4.統(tǒng)計學處理：隨機多組間均數(shù)比較用單向方差分析法，組間多重比較比較用SNK-q法，隨機多組計數(shù)資料率

8、及比值比較用卡方檢驗。資料間相關分析用線性相關，顯著性用t檢驗，非正態(tài)分布資料用Spearman相關分析，顯著性檢驗用非參數(shù)檢驗。檢驗p值統(tǒng)一為0.05。 結果 1.冠心病患者抗OX-LDL抗體水平顯著高于對照組，其中又以ACS患者為顯著，ACS患者外周血中的抗OX-LDL抗體又具有延遲效應，觀察期內入院后7-10天的水平最高，各組之間的差異也最明顯：AMI組(42.33±34.71)、UAP(47.45±20.56)、

9、SAP組(34.61±40.88)。冠狀動脈造影結果的半定量分析提示，冠心病患者各組之間無顯著性差異：AMI組(1.0716±0.8957)、UAP組(1.0311±0.5971)、SAP組(0.9555±0.0133)、CON組(0.9158±0.0278)?？筄X-LDL抗體水平和血漿LDL濃度及冠脈狹窄程度之間沒有顯著相關性。在冠心病相關的各個因子中，體重指數(shù)(p=0.000)、平均吸煙量(p=0.007)、血壓水平(p=0.00

10、0)、空腹血糖水平(p=0.04)及高密度脂蛋白(High-densitylipoprotein，HDL，p=0.08)在各組之間有顯著性差異。 2.動物模型的主動脈在高脂喂養(yǎng)8周后即形成明顯的AS斑塊，高脂組的相對斑塊面積是辛伐他汀預防組的約9.44倍。而到了第14周時高脂組的相對斑塊面積進一步增加到8周時的2.93倍，是辛伐他汀治療組的6.33倍，差異具有統(tǒng)計學意義。隨著動脈粥樣硬化的發(fā)展，IgG型免疫復合物在粥樣斑塊內的形

11、成明顯增多，而IgM型免疫復合物在斑塊病變中的沉積不明顯。同期的高脂組免疫組化染色強陽性率都顯著高于辛伐他汀干預組。IgG型免疫復合物在早期斑塊分布于內膜下，而在成熟斑塊則主要分布于脂質核心和靠近內膜面肩部。 3.在加入抗OX-LDL抗體后可，OX-LDL刺激后的單核/巨噬細胞CD36、CD40、MMP9等因子的mRNA表達均有不同程度的減少，其中CD36和MMP9在U937細胞和在兔單核細胞分別平均降低了約64.80％和35.

12、18％，細胞種屬間差異有統(tǒng)計學意義。在U937細胞和在兔單核細胞分別平均降低了約47.21％和36.72％，種屬間差異無統(tǒng)計學意義。 結論 1.抗OX-LDL抗體水平和動脈粥樣硬化臨床事件有正性關系，提示了自身免疫在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。經(jīng)過標準化測定的抗OX-LDL抗體可能成為評估AS危險的一個重要指標。抗OX-LDL抗體水平和冠脈狹窄程度及外周血LDL濃度缺乏相關性，其可能是AS一個相對獨立的因子

13、。在國人的AS患者中，HDL濃度的變化較LDL濃度的變化可能更有意義。 2.動脈粥樣硬化斑塊內存在著免疫復合物，以IgG型為主，其出現(xiàn)時間和分布情況均提示它和AS的形成和發(fā)展密切相關。IgM型免疫復合物在斑塊內少量存在，其作用不甚清楚，可能和免疫調節(jié)有關。辛伐他汀可以在顯著降低血脂和控制斑塊發(fā)展的同時可以有效的減少斑塊內免疫復合物的生成，可能和其具有的免疫調節(jié)作用有關。 3抗OX-LDL抗體在離體細胞實驗中可以抑制單核細