BMP-7在肝臟的表達及其可能作用.pdf

1、目的:旨在通過研究BMP-7在SD大鼠肝纖維化模型、肝衰竭模型及SD大鼠的HSCs及HCs、慢性肝炎、肝硬化、肝癌等慢性HBV感染者的表達規(guī)律，及給予重組人BMP-7及重組人TGF-β1干預(yù)體外培養(yǎng)HSCs、HCs及HepG2細(xì)胞的增殖，發(fā)現(xiàn)BMP-7在肝臟的表達規(guī)律及其可能作用。 方法:采用原位灌流消化及密度梯度離心的方法獲得原代SD大鼠的HSCs。采用原位灌流消化及使用Percoll分離液純化的方法獲得原代SD大鼠的HCs。

2、通過體外培養(yǎng)的方法獲得傳代SD大鼠的HSCs。采用腹腔注射40﹪四氯化碳制作SD大鼠肝纖維化模型。采用D-氨基半乳糖一次腹腔注射制成大鼠急性肝衰竭模型。 所有模型經(jīng)檢測肝功能、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白(laminin，LN)等指標(biāo)及病理學(xué)檢查證實構(gòu)建成功。通過肝穿刺活檢或肝移植離體后即刻取材的方法獲得慢性HBV感染病人的肝組織標(biāo)本。正常人肝組織取自肝移植供肝術(shù)前常規(guī)制作的病理蠟塊。通過RT-PCR及凝膠電泳圖像分析，分析BMP-1至

3、BMP-7 nRNA在肝臟的表達。通過實時熒光定量RT-PCR分析BMP-7 mRNA在正常大鼠、肝纖維化模型、急性肝衰竭模型的表達。采用Western Blot證實BMP-7在SD大鼠肝臟的表達。對56例慢性HBV感染者及5例正常對照肝組織按病理診斷分組。進行BMP-7的免疫組織化學(xué)染色，觀察光鏡下分布特點，并取部分標(biāo)本進行圖像分析。取4例重型肝炎肝組織、8例肝癌患者癌結(jié)節(jié)及3例癌旁組織進行實時熒光定量RT-PCR，檢測BMP-7 m

4、RNA的表達。并采用Western Blot分析BMP-7在重型肝炎及肝癌患者肝組織的表達。體外培養(yǎng)HSCs、HCs及}]epG2細(xì)胞，并給予重組人BMP-7及重組人TGF-β1處理，采用MTT法分別測定3種細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果:BMP-1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7在正常SD大鼠肝臟、SD大鼠肝纖維化模型肝組織、正常SD大鼠新鮮分離肝星狀細(xì)胞中均有表達；且在肝纖維化模型肝組織中表達增加；在SD大

5、鼠肝衰竭模型肝組織中BMP—1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-7表達減少，BMP-6未見明顯表達。BMP—1、BMP-2、BMP-7在正常SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞有表達。Western Blot結(jié)果顯示BMP-7在正常及肝纖維化模型SD大鼠肝臟均有表達。 免疫組織化學(xué)及圖像分析顯示BMP-7陽性單位在正常人肝臟、病毒性肝炎(乙型)慢性輕度、中度、重度患者肝臟有逐漸增加趨勢，在重型肝炎、肝硬化患者肝臟較病毒性肝炎(乙型

6、)慢性中度、重度患者低；進-步比較BMP-7陽性區(qū)灰度有相似結(jié)果。BMP-7在肝臟既有胞漿型表達，也有胞膜型表達。在慢性中度、重度患者及肝硬化結(jié)節(jié)內(nèi)為彌漫性表達；但在重型肝炎患者，僅呈灶狀表達。Western Blot證實BMP-7在重型肝炎及肝癌患者肝組織均有表達。 TGF-β1對人星狀細(xì)胞LX-2增殖有抑制作用，BMP-7可以拮抗這種抑制作用。 BMP-7對SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞增殖有促進作用。 BMP-7在

7、癌周組織有彌漫或灶狀表達，在癌結(jié)節(jié)表達極少。TGF-β1對體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞增殖有輕度抑制作用。BMP-7對體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞增殖有促進作用。TGF-β1在培養(yǎng)24小時可以部分抑制BMP-7對HepG2細(xì)胞增殖的促進作用，在培養(yǎng)48小時抑制作用消失。 結(jié)論: 1．BMP1、BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7在SD大鼠肝臟、新鮮分離星狀細(xì)胞中均有表達，且在肝纖維化模型肝組織中表達增加、在肝衰

8、竭模型肝組織中表達減少。BMP-1、BMP-2、BMP-7在正常SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞有表達。 2．BMP-7在人肝組織有表達，且在慢性乙型肝炎患者肝組織中表達增多；在重型肝炎(肝功能衰竭)肝組織中表達減少。 3．TGF-β1對人肝星狀細(xì)胞系LX-2增殖有抑制作用，BMP-7可以拮抗這種抑制作用。 4．BMP-7對SD大鼠新鮮分離肝細(xì)胞增殖有促進作用。 5． BMP-7在人肝癌結(jié)節(jié)中表達極少。對體外培養(yǎng)的