麻黃水提物霧化吸入對支氣管哮喘小鼠氣道炎癥的影響.pdf

1、目的:研究麻黃水提物霧化吸入對支氣管哮喘小鼠氣道炎癥的影響,及白細(xì)胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)在哮喘小鼠氣道中的表達(dá)。探討麻黃治療哮喘的作用機(jī)制,為麻黃霧化吸入治療哮喘提供實驗資料和理論依據(jù)。
　　 方法:(1)麻黃加水浸泡30min后煎制1h濃縮,配成濃度相當(dāng)于含生藥1g／ml的水煎劑,貯存于4℃冰箱備用。(2)選取24只健康雌性BALB／c小鼠(5～6周齡),體重16～20g,隨機(jī)分為3

2、組:對照組(A組)、哮喘組(B組)、麻黃治療組(C組),8只／組。除A組外,B、C組均建立支氣管哮喘動物模型。第0、7d腹腔注射卵蛋白抗原液0.2 ml(含Al(OH)31mg和卵蛋白100μg)致敏,第14d開始每天滴鼻吸入40μl2％卵蛋白生理鹽水液進(jìn)行激發(fā),1次／d,連續(xù)7d。C組小鼠在每次滴鼻激發(fā)前1h予麻黃水煎液50ml霧化吸入30min,2次／d,連續(xù)9d。A組則用等量生理鹽水代替抗原液進(jìn)行腹腔注射致敏、激發(fā)和霧化吸入治療,

3、B組用等量生理鹽水進(jìn)行霧化吸入治療。分別于建模第21d及23d腹腔麻醉行肺泡灌洗及留取肺組織標(biāo)本。(3)計數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞總數(shù)和EOS總數(shù)；肺組織作病理切片HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察支氣管、支氣管周圍及肺組織的病理學(xué)改變；免疫組織化學(xué)染色(SP)法測定支氣管肺組織中IL-13、Eotaxin蛋白表達(dá)；雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測支氣管肺組織中IL-13、Eotaxin的蛋白濃度。實驗數(shù)據(jù)采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差((

4、x)±s)表示,用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析及直線相關(guān)分析。
　　 結(jié)果:(1)B組BALF中WBC、EOS數(shù)量明顯增高(P<0.05)；與B組比較,C組中WBC、EOS數(shù)量明顯減少(P<0.05),但仍高于A組(P<0.05)。(2)常規(guī)病理切片HE染色顯示:A組氣道上皮完整,支氣管、細(xì)支氣管管壁平滑肌層薄,管腔規(guī)則,無明顯分泌物貯留,粘膜皺襞矮平,肺泡間隔正常,周圍無明顯炎癥細(xì)胞浸潤；B組氣道上皮細(xì)胞增生肥大

5、,上皮有脫落不完整,平滑肌增厚,支氣管管腔有明顯狹窄,管腔可見粘液栓,肺泡間隔增厚,支氣管周圍大量炎性細(xì)胞浸潤；與B組比較,C組小鼠支氣管管壁增厚及管腔狹窄均減輕,支氣管周圍及肺泡區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少,肺泡間隔明顯變薄,肺泡腔變大。(3)免疫組織化學(xué)染色法檢測顯示:與A組比較,B組支氣管上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞陽性表達(dá)細(xì)胞多,著色深,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C組陽性表達(dá)細(xì)胞較B組少,著色較淺,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(4

6、)ELISA結(jié)果顯示:B組支氣管肺組織IL-13、Eotaxin濃度明顯高于A組、C組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與B組比較,C組小鼠IL-13、Eotaxin蛋白濃度明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(5)各相關(guān)關(guān)系分析:IL-13蛋白表達(dá)與BALF中EOS計數(shù):B組均明顯增加(r=0.746,P<0.05),C組均明顯減少(r=0.729,P<0.05)。Eotaxin蛋白表達(dá)與BALF中EOS計數(shù):B組均明顯升高

7、(r=0.712,P<0.05),C組均明顯降低(r=0.734,P<0.05)。IL-13蛋白表達(dá)與Eotaxin蛋白表達(dá)關(guān)系:B組IL-13及Eotaxin蛋白濃度皆明顯升高(r=0.803,P<0.05),C組IL-13及Eotaxin蛋白濃度皆明顯降低(r=0.761,P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)哮喘小鼠支氣管肺組織中存在IL-13、Eotaxin蛋白表達(dá)上調(diào)。(2)麻黃水提物霧化吸入能抑制哮喘小鼠氣道炎癥。(3