二甲雙胍灌胃對支氣管哮喘小鼠氣道重塑的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　觀察二甲雙胍灌胃對慢性哮喘小鼠氣道重塑的影響并探討其機(jī)制
　　方法：
　　將30只清潔級C57BL/6雌性小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為對照組，模型組，二甲雙胍組。其中模型組及二甲雙胍組于實(shí)驗(yàn)第0、7、14天采用腹腔注射的方式予以100ugOVA（卵清蛋白）+2mg氫氧化鋁致敏。并在第21-60天采用50ugOVA3次/周滴鼻激發(fā)建立慢性哮喘模型。在對照組中則采用等量的NS（生理鹽水）腹腔注射致敏以及

2、滴鼻激發(fā)。從第21天開始，按照二甲雙胍300mg/Kg/天給予二甲雙胍組小鼠灌胃處理，而對照組跟模型組則用等量生理鹽水行灌胃處理。末次滴鼻激發(fā)24小時(shí)內(nèi)，采用眼球摘除法取血。通過ELISA檢測各組小鼠血清中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1含量。三組小鼠在眼球摘除取血后，均采用脫頸椎法處死。處死后取出各組小鼠左肺下葉，將其于4％多聚甲醛溶液中固定行masson染色。在masson染色的基礎(chǔ)下采用Image-Pro Plus(6.0)

3、圖像分析系統(tǒng)觀察膠原蛋白在氣道基底膜下沉積情況、支氣管壁厚度以及平滑肌細(xì)胞厚度。取出小鼠右肺，固定于4％多聚甲醛溶液中以行RT-PCR檢測各組小鼠肺組織中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況觀察
　　模型組哮喘小鼠精神食欲均欠佳，毛發(fā)臟亂，少動，體重減輕。在滴鼻激發(fā)后，模型組可看到小鼠煩躁、呼吸頻率加快、嘴唇粘膜紫紺、球結(jié)膜水腫及偶伴噴嚏，有時(shí)還可見小鼠在咳嗽噴嚏時(shí)出現(xiàn)大小便

4、失禁。對照組精神食欲良好，體重稍增加，小鼠在滴鼻后偶出現(xiàn)嗆咳，但未出現(xiàn)煩躁、呼吸頻率加快、噴嚏、嘴唇粘膜紫紺、球結(jié)膜水腫及大小便失禁等情況。二甲雙胍干預(yù)組小鼠同樣出現(xiàn)煩躁、呼吸頻率加快、噴嚏、嘴唇粘膜紫紺、球結(jié)膜水腫等，但較模型組有所減輕，偶見小鼠大小便失禁。
　　2.二甲雙胍減輕支氣管哮喘小鼠氣道病理變化
　　模型組小鼠見支氣管管壁增厚，氣道粘膜上皮增生，氣管內(nèi)粘液滲出，肺泡結(jié)構(gòu)破壞等明顯。二甲雙胍組上述改變較模型組明顯減

5、輕。而對照組支氣管、肺泡等結(jié)構(gòu)相對完整。
　　3.二甲雙胍減輕支氣管哮喘小鼠氣道基底膜下膠原蛋白沉積、支氣管壁及平滑肌細(xì)胞厚度
　　4.二甲雙胍下調(diào)支氣管哮喘小鼠血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的水平
　　與對照組相比較，模型組及二甲雙胍組小鼠血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的水平明顯增加(p＜0.05)。與模型組相比較，二甲雙胍組小鼠血清TGF-β1水平、血清MMP-9及TIMP-1的水平顯著下降

6、(p＜0.05)。
　　5.二甲雙胍減輕支氣管哮喘小鼠肺組織中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表達(dá)
　　與對照組相比較，模型組及二甲雙胍組小鼠肺組織中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表達(dá)顯著增加(p＜0.05)。與模型組相比較，二甲雙胍組小鼠組織中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表達(dá)明顯下降(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.OVA可以誘導(dǎo)慢性支氣管哮喘小鼠模型的形成，并導(dǎo)致哮喘小鼠血