版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
黑色素瘤(melanoma)是惡性程度極高的一種腫瘤,占皮膚腫瘤死亡病例的絕大多數(shù)。主要發(fā)生于皮膚、粘膜和內(nèi)臟器官。黑色素瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率較高,預(yù)后較差,晚期易通過淋巴道及血液轉(zhuǎn)移。其發(fā)病率隨人種、地域、種族的不同有所差異。日光照射是黑色素瘤的主要誘因,其他誘發(fā)因素還包括家族史,惡性斑痣,較大的先天性黑素細(xì)胞痣和發(fā)育不良性痣綜合征。中國雖屬黑色素瘤的低發(fā)區(qū),但近年來發(fā)病率卻呈不斷上升趨勢。
惡性黑素瘤
2、擴(kuò)散迅速,可在診斷數(shù)月后死亡。目前外科手術(shù)切除是治療黑色素瘤的常用方法,早期5年治愈率可達(dá)100%。因此早診斷,早治療是黑色素瘤預(yù)后的關(guān)鍵。惡性黑色素瘤對放化療不敏感,而傳統(tǒng)的中藥在抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移治療方面展示了良好的應(yīng)用潛能。
白藜蘆醇是一種天然多酚類化合物,主要存在于葡萄果皮中。近年來它的抗癌作用已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注。許多研究已經(jīng)證實(shí),白藜蘆醇具有廣泛的生物學(xué)活性,包括神經(jīng)保護(hù)作用、抗癌、誘導(dǎo)凋亡等作用。白藜蘆醇已被確定
3、為化學(xué)防癌藥,能夠有效地抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇能夠抑制B16M細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,從而抑制B16M細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移。本研究主要探討黑色素瘤細(xì)胞穿越內(nèi)皮單層過程中白藜蘆醇對其表面某些粘附分子表達(dá)水平的影響。
方法和結(jié)果:
1.白藜蘆醇對WM239細(xì)胞的毒性作用
1.1、MTT法檢測白藜蘆醇對WM239細(xì)胞增殖的影響
12.5~200μmol/L的白藜蘆醇作用于W
4、M239細(xì)胞48h和72h后,對其增殖具有一定的抑制作用,作用72h時(shí),濃度在50μmol/L以上其抑制率高于50%,且抑制程度與藥物濃度呈正相關(guān)。
1.2、流式細(xì)胞術(shù)檢測白藜蘆醇對WM239細(xì)胞周期及凋亡的影響
其中0、25、50和100μmol/L藥物與WM239細(xì)胞作用48h后,凋亡率分別為0.1%、9.7%、8.9%和19.3%,處理組與未處理組相比細(xì)胞凋亡明顯增加,G0/G1期細(xì)胞分別為7l.9%、
5、77.3%、81.0%和83.7%,S期分別為21.5%、17.8%、16.0%和14.6%,G2/M期為6.5%、4.8%、2.9%和1.8%,細(xì)胞周期阻滯于G1期,S期和G2期細(xì)胞比例下降,劑量依賴關(guān)系明顯。
2.白藜蘆醇對WM239遷移的抑制作用
2.1、MTT法篩選合適的白藜蘆醇濃度
應(yīng)用MTT法檢測白藜蘆醇對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和黑色素瘤細(xì)胞(WM239)的毒性作用,以確定實(shí)驗(yàn)
6、所需的藥物濃度和相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)。結(jié)果表明白藜蘆醇濃度小于25μmol/L時(shí),48小時(shí)內(nèi)對兩種細(xì)胞的毒性作用較弱,隨著時(shí)間的延長和藥物濃度的增加,白藜蘆醇對兩種細(xì)胞的毒性作用逐漸增強(qiáng)。
2.2、RT-PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)
應(yīng)用RT-PCR檢測白藜蘆醇的不同藥物濃度作用于WM239細(xì)胞后基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達(dá)的情況。結(jié)果表明隨著藥物濃度的逐漸升高M(jìn)MP-9的表達(dá)成下降的趨勢
7、。
2.3、白藜蘆醇對WM239細(xì)胞遷移能力的影響
應(yīng)用Transwell小室法檢測不同濃度的白藜蘆醇對黑色素瘤遷移能力的影響。結(jié)果表明,白藜蘆醇能夠抑制黑色素瘤細(xì)胞的遷移能力。并且隨著藥物濃度的逐漸增加,WM239細(xì)胞的遷移能力逐漸減弱。
3.白藜蘆醇對WM239與HUVEC共培養(yǎng)體系N-cadherin磷酸化的影響
3.1、白藜蘆醇對WM239和HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)體系中N-c
8、adherin表達(dá)的影響
應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測WM239細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)體系中N-cadherin表達(dá)的情況。結(jié)果表明,隨著藥物濃度的增加N-cadherin表達(dá)基本沒有變化,這說明,白藜蘆醇有可能不是通過抑制N-cadherin表達(dá)來干涉WM239細(xì)胞轉(zhuǎn)移的。
3.2、白藜蘆醇對WM239和HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)體系中N-cadherin胞內(nèi)段磷酸化及與p-catenin結(jié)合情況的影響
9、應(yīng)用westemblot檢測WM239和HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)體系中N-cadherin胞內(nèi)段磷酸化及與p-catenin結(jié)合的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,N-cadherin胞內(nèi)段磷酸化的量隨著白藜蘆醇藥物濃度的升高而逐漸降低,N-cadherin胞內(nèi)結(jié)合的p-catenin隨著藥物濃度的升高逐漸升高。
3.3、白藜蘆醇對Src活化的影響
應(yīng)用westernblot檢測WM239和HUVEC細(xì)胞共培養(yǎng)體系中Src活化
10、的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著白藜蘆醇藥物濃度的逐漸升高,P-Src表達(dá)量逐漸降低。
結(jié)論:
本研究通過建立黑色素瘤細(xì)胞穿越內(nèi)皮單層的體外模型。探討了白藜蘆醇抑制黑色素瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制。結(jié)果表明,白藜蘆醇可以抑制黑色素瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力,并且藥物濃度與抑制率呈正相關(guān)。白藜蘆醇對共培養(yǎng)體系細(xì)胞表面粘附分子N-cadherin的表達(dá)影響較小,它主要是通過抑制Src的活化,降低了N-cadherin胞內(nèi)段磷酸化,致使游離
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- miR-27a在WM239細(xì)胞中的表達(dá)及對其生物學(xué)特性的影響.pdf
- 白藜蘆醇對培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞的影響.pdf
- 白藜蘆醇對LPS誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞增殖及管型形成的影響.pdf
- N-cadherin、E-cadherin對不同轉(zhuǎn)移方式的腫瘤細(xì)胞行為的影響.pdf
- 白藜蘆醇對腎癌細(xì)胞的影響及機(jī)制研究.pdf
- 磷酸化肽受體設(shè)計(jì)、合成及與磷酸化肽作用機(jī)制研究.pdf
- 洛伐他汀對興奮性毒性損害和Tau蛋白過度磷酸化的影響及作用機(jī)制.pdf
- tau蛋白磷酸化在錳誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性中的作用.pdf
- 葡萄采后白藜蘆醇的誘導(dǎo)與釀造工藝對葡萄酒中白藜蘆醇的影響.pdf
- N-cadherin介導(dǎo)FRK對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲作用機(jī)制的研究.pdf
- 白藜蘆醇對低氧內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 白藜蘆醇對HepG2細(xì)胞的影響及機(jī)制探討.pdf
- 白藜蘆醇對淋巴瘤細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf
- Ezrin的磷酸化調(diào)控作用.pdf
- Tau蛋白的PKA磷酸化位點(diǎn)突變體對其磷酸化的影響.pdf
- N-cadherin介導(dǎo)GDNF對DA能神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf
- 磷酸化的tau蛋白對細(xì)胞周期的作用及其機(jī)制.pdf
- 白藜蘆醇聯(lián)合阿糖胞苷對K562細(xì)胞的影響.pdf
- N-cadherin在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制研究.pdf
- 虎杖白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和花生白藜蘆醇含量的研究.pdf
評論
0/150
提交評論