腹腔注射LPS對大鼠認知功能的影響及HO-1和iNOS在其中的作用.pdf

1、認知功能障礙是一類嚴重影響中老年人身心健康和生活質(zhì)量的疾病，隨著我國進入老齡社會，其發(fā)病率逐年增加，目前，對認知功能障礙的研究已成為現(xiàn)在社會研究的熱點之一。迄今為止，本病的病因、發(fā)病機制尚未十分清楚，也無有效的治療方法和藥物。長久以來人們認為中樞神經(jīng)系統(tǒng)是免疫特免位點，但現(xiàn)在有研究證實外周炎癥可引起認知功能障礙[1]，其機制可能是通過外周炎癥因子（如IL-1等）作用于中樞進而激發(fā)中樞免疫細胞釋放大量炎癥因子引起[2]。Kohman等[3

2、]證實腹腔注射LPS可使大鼠體內(nèi)toll樣受體激活從而引起炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-а等表達增加，引起全身炎癥反應，并最終導致認知功能障礙。NaveenK等[4]通過行為學實驗方法發(fā)現(xiàn)腹腔注射LPS后24小時至7天，大鼠的記憶功能明顯降低。有研究發(fā)現(xiàn)，血紅素加氧酶-1（HO-1）是血紅素家族成員之一，為32kd的熱休克蛋白可被多種應急刺激誘導[5]，其不僅能催化血紅素生成一氧化碳、鐵和膽紅素，還有明顯的抗炎作用，對阿爾茨海默

3、?。ˋD?。┑幕颊哂幸鎇6]。誘導型一氧化氮合酶（iNOS）在生理條件下表達很少，但在炎癥時表達明顯升高，可誘導產(chǎn)生大量NO從而誘發(fā)炎癥發(fā)生[7]。鄧醫(yī)宇[8]等證實iNOS可能參與缺血后海馬神經(jīng)元的損害，是構成血管性癡呆的機制之一。SrisookK[9]等研究證明HO-1可阻斷iNOS表達。本實驗首先研究不同劑量LPS腹腔注射對大鼠認知功能的影響，進而探討HO-1和iNOS在其中的作用。
　　第一部分，腹腔注射不同劑量的LPS對

4、大鼠認知的影響
　　目的：
　　研究腹腔注射不同劑量的LPS對大鼠認知的影響
　　方法：
　　1．腹腔注射不同劑量的LPS對大鼠學習能力的影響
　　將18只SD大鼠隨機分為三組：Control組為腹腔注射生理鹽水，LPS-6組為腹腔注射6mg/kgLPS，LPS-12組為腹腔注射12mg/kgLPS，每組6只大鼠。
　　三組大鼠分別在腹腔注射生理鹽水或LPS前2h和后2h、4h、8h、16h、24h進

5、行定位航行試驗，通過測量平均上臺潛伏期和平均靶象限活動時間的比率來評定其空間學習能力。
　　2．腹腔注射不同劑量的LPS對大鼠記憶能力的影響
　　將18只SD大鼠隨機分為三組：Control組為腹腔注射生理鹽水，LPS-6組為腹腔注射6mg/kgLPS，LPS-12組為腹腔注射12mg/kgLPS，每組6只大鼠。
　　注射生理鹽水或LPS36h后撤除水面下的站臺，然后將大鼠隨機從不同象限（除靶象限外）面壁置入池內(nèi)3次，

6、每次記錄大鼠在60s內(nèi)游泳軌跡并進行分析。測量大鼠在靶象限活動時間的比率和穿臺次數(shù)，以評判大鼠的空間記憶能力。
　　結果：
　　1．腹腔注射不同劑量的LPS對大鼠學習能力的影響
　　在給予LPS或生理鹽水腹腔注射前，各組大鼠的登臺潛伏期和靶象限停留時間百分比都無統(tǒng)計學差異。在LPS腹腔注射后2h，4h，8h，16h和24h，與Con組相比，LPS-12組登臺潛伏期明顯延長（P<0.05），靶象限停留時間明顯縮短（P<0

7、.05）且兩組在8h差異最大；在LPS腹腔注射后8h，與Con組相比，LPS-6組登臺潛伏期延長（P<0.05），靶象限停留時間縮短（P<0.05），而在其他時間點無統(tǒng)計學差異。
　　2．腹腔注射不同劑量的LPS對大鼠記憶能力的影響
　　在空間探索試驗中，在LPS腹腔注射后36h，與Con組相比，LPS-12組靶象限停留時間和穿臺次數(shù)上都明顯減少（P<0.05），而LPS-6組無統(tǒng)計學差異。
　　第二部分，在腹腔注射L

8、PS引起大鼠認知功能障礙過程中HO-1和iNOS的作用
　　目的：
　　研究在腹腔注射LPS引起大鼠認知功能障礙過程中HO-1和iNOS的作用
　　方法：
　　將30只SD大鼠隨機分為5組：Con組、LPS組、SnPP組、CoPP組和AG組。LPS組、SnPP組、CoPP組和AG組大鼠分別給予12mg/kgLPS腹腔注射，在腹腔注射LPS前24h分別給予Vehicle（生理鹽水）、SnPP（20mg/kg，HO-

9、1阻斷劑）、CoPP（5mg/kg，HO-1激動劑）和AG（100mg/kg，iNOS阻斷劑）；而Con組給予相同容積的生理鹽水作為對照。在腹腔注射LPS后8h進行定位航行試驗，36h進行空間探索試驗。
　　結果：
　　實驗前，各組大鼠的登臺潛伏期和靶象限停留時間百分比都無統(tǒng)計學差異。在LPS腹腔注射后8h時，與Con組相比，LPS組、SnPP組和AG組登臺潛伏期明顯延長（P<0.05），靶象限所占時間百分比明顯減少（P<0

10、.05），而CoPP組都無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；在LPS腹腔注射后36h，與Con組相比，LPS-12組、SnPP組和AG組在靶象限停留時間和穿臺次數(shù)上都明顯減少（P<0.05），而CoPP組都無明顯差異（P>0.05）。在LPS腹腔注射后8h，與LPS-12組相比，SnPP組登臺潛伏期明顯延長(P<0.05),靶象限時間所占百分比則明顯減少（P<0.05），CoPP組和AG組登臺潛伏期明顯縮短（P<0.05），靶象限所占時間百分

11、比明顯增加（P<0.05）；在LPS腹腔注射36h，與LPS-12組相比，SnPP組在靶象限停留時間和穿臺次數(shù)上都明顯減少（P<0.05），CoPP組在靶象限停留時間和穿臺次數(shù)都明顯增加（P<0.05），而AG組都無明顯差別（P>0.05）。
　　結論：
　　1．腹腔注射小劑量LPS（6mg/kgLPS）對大鼠的學習和記憶能力無明顯影響，而腹腔注射大劑量的LPS（12mg/kgLPS）可顯著降低大鼠的學習和記憶能力。