HO-1對原代培養(yǎng)大鼠AEC-Ⅱ凋亡機制的影響.pdf

1、目的：探討血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)對大鼠原代培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型上皮細胞(alveolar epithelial cell typeⅡ，AEC-Ⅱ)過氧化氫(hygrogen peroxide，H2O2)刺激后細胞內(nèi)Cleaved-Caspase-3及Cyt-c表達的影響。
　　 方法：選取健康雄性SD大鼠，予戊巴比妥鈉、肝素腹腔注射麻醉抗凝、氣管插管、開胸肺動脈置管，灌洗取肺，胰酶消化，制成肺組

2、織懸液，分離提純AEC-Ⅱ，將細胞以2×106個/ml接種于細胞培養(yǎng)瓶，原代培養(yǎng)24 h，將細胞隨機分為四組：正常對照組，H2O2損傷組，HO-1組，HO-1抑制組(鋅原卟啉Ⅸ)。采用H2O2(0.5 mmol/L)培養(yǎng)基中直接加入損傷AEC-Ⅱ，模擬氧自由基(Reactive oxygen species，ROS)攻擊損傷人體內(nèi)AEC-Ⅱ情況，建立AEC-Ⅱ凋亡模型；用HO-1(0.2μmol/L，)或鋅原卟啉Ⅸ(20μmol/L)進

3、行細胞培養(yǎng)基上損傷前直接預(yù)處理。電鏡鑒定AEC-Ⅱ，流式細胞儀檢測藥物干預(yù)前及干預(yù)后細胞凋亡率，蛋白印跡法(Western blotting，WB)檢測目標蛋白Cleaved-Caspase-3及Cyt-C表達變化及時間相關(guān)性。
　　 結(jié)果：電鏡下鑒定可見AEC-Ⅱ的特征性結(jié)構(gòu)：細胞表面長短不一、粗細不等微絨毛，胞漿內(nèi)含數(shù)量不等、大小不一、不同成熟階段嗜鋨性板層小體。流式細胞儀檢測：藥物干預(yù)前，各組細胞凋亡率、存活率基本處于同一

4、水平(P>0.05)；藥物干預(yù)后，與正常對照組比較，H2O2損傷組、HO-1抑制組細胞凋亡率增加(P<0.05)，且12h內(nèi)隨H2O2作用時間延長，細胞凋亡率隨之升高；與H2O2組比較，HO-1組AEC-Ⅱ凋亡率明顯降低(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。WB法：與正常組比較，HO-1組Cleaved-Caspase-3、Cyt-C表達減弱，且12h內(nèi)隨時間的變化差異明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與HO-1組比較，H2O2組、