青海、江蘇辣椒輕斑駁病毒分子檢測及基因組結(jié)構(gòu)特征分析.pdf

1、辣椒（Capsicum frutescens L）在我國是重要的蔬菜作物，常年栽培面積超過1.33×106 hm2，在蔬菜的周年供應(yīng)中起著重要的作用。煙草花葉病毒屬的辣椒輕斑駁病毒（Pepper mild mottle virus，PMMoV）近年來在我國陸續(xù)出現(xiàn)危害報(bào)道，一些地區(qū)已上升為當(dāng)?shù)匚：苯返膬?yōu)勢病毒種類。而在青海及江蘇省尚未有相關(guān)報(bào)道，本研究對兩地的辣椒病毒病進(jìn)行了調(diào)查，利用RT-PCR法對PMMoV及相關(guān)病毒進(jìn)行了分子檢測

2、，同時(shí)對檢出的PMMoV利用分段法對其基因組進(jìn)行了克隆，明確了其基因組結(jié)構(gòu)及分類地位，并對其致病類型進(jìn)行了探討。相關(guān)研究結(jié)果為后續(xù)研究PMMoV致病機(jī)理及相關(guān)防控措施的制定奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴對青海和江蘇地區(qū)的設(shè)施栽培的辣椒進(jìn)行了病害調(diào)查，兩地均發(fā)現(xiàn)一類表現(xiàn)葉片皺縮、斑駁癥狀的病毒病，田間發(fā)病率在5％-20％之間，個(gè)別棚室發(fā)病率超過60％。早期發(fā)病的植株會伴有明顯的矮化，影響植株的結(jié)果率，對產(chǎn)量影響很大。有些發(fā)

3、病植株的果實(shí)上會出現(xiàn)褪綠斑塊，對果實(shí)的商品性狀影響較大。⑵對青海和江蘇采集的表現(xiàn)皺縮斑駁癥狀的辣椒病樣進(jìn)行了分子檢測，從中檢出辣椒輕斑駁病毒，檢出率分別為88.0％，87.5％，這是青海和江蘇首次報(bào)道該病毒發(fā)生情況。⑶成功克隆并獲得了PMMoV青海分離物（PMMoV-Qh-10-8-5）和江蘇分離物（PMMoV-Js-6-15-2）全基因序列，其基因組全長均為6356 bp，編碼4個(gè)開放閱讀框，ORF1（70-3423 nt）編碼一個(gè)全

4、長1117 aa、分子量約為126 KDa的蛋白，是參與病毒復(fù)制的126K依賴RNA的RNA復(fù)制酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）；ORF2（70-4908 nt）編碼一個(gè)全長1613 aa、分子量約為183 KDa的蛋白，是參與病毒復(fù)制的183K依賴RNA的RNA復(fù)制酶。ORF3（4909-5682 nt）編碼一個(gè)257 aa、分子量約為28 KDa的蛋白，是參與病毒運(yùn)動的運(yùn)動蛋白（movemen

5、t protein，MP）。ORF4（5685-6350 nt）編碼一個(gè)157 aa、分子量約為17 KDa的蛋白，是參與病毒組裝的的外殼蛋白（coat protein，CP）。⑷基于全基因組序列分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PMMoV分離物可以分為3個(gè)簇，其中PMMoV-Qh-10-8-5和PMMoV-Js-6-15-2與來自日本（C-1421, J, TPo-2-19, Pa18）、西班牙（S）、巴西（BR-DF01）、印度（HP1）及中國（CN）