TLR2在皮膚癬菌感染中對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌γ-IFN和IL-8的影響.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的分離和培養(yǎng)方法，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。
　　 方法：取青少年包皮環(huán)切術(shù)后的包皮組織，經(jīng)無菌處理后，用常用的胰酶消化法分離表皮和真皮，分離出的表皮細(xì)胞用無血清角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)并用免疫細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞，成纖維細(xì)胞污染少，貼壁率高，熒光顯微鏡下細(xì)胞胞漿呈角蛋白陽性染色。6代以內(nèi)的細(xì)胞活性均較好。
　　 結(jié)論：用

2、常規(guī)的酶消化法分離表皮，以無血清角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)能成功培養(yǎng)出角質(zhì)形成細(xì)胞。
　　 第二部分
　　 目的：觀察紅色毛癬菌刺激人角質(zhì)形成細(xì)胞后γ-IFN及IL-8的變化，以及TLR-2對(duì)γ-IFN和IL-8的分泌的影響；探討TLR-2在抗皮膚癬菌感染中的作用。
　　 方法：用紅色毛癬菌懸液分別刺激TLR2抗體處理前后的角質(zhì)形成細(xì)胞，采用ELISA方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞上清液中γ-IFN及IL-8的濃度，并設(shè)置

3、陰性對(duì)照；比較TLR2抗體處理前后γ-IFN及IL-8濃度的變化。
　　 結(jié)果：紅色毛癬菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后，γ-IFN及IL-8濃度明顯升高（P﹤0.05），γ-IFN在4h即達(dá)到(85.36±4.54)pg/ml,16h后達(dá)到（445.58±13.99）pg/ml ；IL-8在4h即達(dá)到(545.426±39.784)pg/ml,16h后達(dá)到（977.182±55.288）pg/ml；用TLR2抗體中和TLR2后，清液中IL

4、-8的濃度在2h、4h、8h、16h各時(shí)間點(diǎn)較中和前低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）；γ-IFN的濃度2h、4h、8h時(shí)間點(diǎn)較中和前低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），而在16h時(shí)間點(diǎn)，上清液中γ-IFN的濃度與中和前比較略低，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。
　　 結(jié)論：紅色毛癬菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后，可促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌γ-IFN和IL-8；TLR2在角質(zhì)形成細(xì)胞分泌γ-IFN和IL-8的過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用