硫氧還蛋白對高氧肺損傷保護作用的機制研究.pdf

1、華中科技大學博士學位論文硫氧還蛋白對高氧肺損傷保護作用的機制研究姓名：單瑞艷申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學（新生兒）指導教師：常立文201105華中科技大學博士學位論文10【關鍵詞】高氧；早產(chǎn)；凋亡信號調(diào)節(jié)激酶；硫氧還蛋白；肺損傷第二部分高氧對胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞硫氧還蛋白及其還原酶表達的影響【目的】研究高氧暴露對胎鼠肺泡二型上皮細胞(typeⅡalveolarepithelialcell，AECⅡ)硫氧還蛋白（thiedoxin，Tr

2、x）及其還原酶（thiedoxinreductase，TrxR）表達的影響及意義。【方法】采用胰酶和膠原酶消化19d的胎鼠肺組織塊，按照差速離心和反復貼壁法，無菌分離、純化、原代培養(yǎng)胎鼠AECⅡ，待其生長至亞融合狀態(tài)時，隨機分為空氣組和高氧組；于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置30min后，空氣組置于同一室內(nèi)空氣中，高氧組通10分鐘的850mLL以上純氧；然后密封培養(yǎng)瓶，置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二組分別于培養(yǎng)12h、24h和48h時，倒置相差顯微鏡下觀察高

3、氧對細胞形態(tài)及活性的影響；采用流式細胞術檢測細胞ROS變化及細胞凋亡情況；采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(reversetranionpolymerasechainreactionRTPCR)方法檢測二組各時間點Trx和TrxRmRNA，Trx1和TrxR1mRNA的表達；采用westernblot檢測胎鼠AECⅡ二組各時間點Trx及Trx1表達變化?！窘Y果】與空氣組比較，高氧暴露各時間點隨時間延長AECⅡ細胞生長狀態(tài)明顯不良，懸浮細胞增

4、多；高氧暴露各時間點細胞內(nèi)ROS生成及凋亡細胞明顯增加（P0.05）；westernblot結果顯示Trx和Trx1蛋白表達變化與mRNA有相同變化趨勢（P0.05）。【結論】高氧暴露使早產(chǎn)大鼠AECⅡ產(chǎn)生過量ROS從而導致AECⅡ細胞損傷和凋亡；高氧暴露可促使胎鼠AECⅡTrx及TrxR的mRNA表達上調(diào)；也可誘導Trx蛋白表達增加，提示Trx系統(tǒng)的表達上調(diào)對高氧誘導的肺泡二型上皮細胞損傷具有重要保護作用。【關鍵詞】高氧；肺泡Ⅱ型上皮