NINJ2基因位點(diǎn)多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景：缺血性腦卒中(Ischemic stroke)，指突然發(fā)生的腦組織局部供血?jiǎng)用}血流灌注減少或血流完全中斷，停止供血、供氧、供糖等，使該局部腦組織崩解破壞；是由多種環(huán)境因素及多種基因相互作用導(dǎo)致的一種多因子疾病，具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高、并發(fā)癥多等特點(diǎn)。在中國(guó)，約3/4的腦卒中是缺血性腦卒中。世界衛(wèi)生組織調(diào)查結(jié)果顯示，中國(guó)腦卒中發(fā)病率排名世界第一。近二十年來，中國(guó)的腦血管疾病發(fā)病率呈直線上升趨勢(shì)，高達(dá)109.7～2

2、17/10萬，腦血管病已成為第三位全國(guó)居民死亡原因。腦卒中是是嚴(yán)重危害人類健康的主要公共衛(wèi)生問題之一，不僅嚴(yán)重危害群眾健康，也造成了沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)；探討其發(fā)病機(jī)制、尋找病因及有效的防治措施，已成為一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。缺血性腦卒中是受遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的多因子疾病，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多環(huán)境危險(xiǎn)因素，如吸煙、飲酒過量、高血壓、糖尿病、血脂異常以及超重肥胖等；同時(shí)，遺傳易感基因的研究也取得了很大進(jìn)展，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與腦卒中相關(guān)的基因有：腎素

3、血管緊張素系統(tǒng)相關(guān)基因、脂代謝相關(guān)基因，凝血/纖溶系統(tǒng)相關(guān)基因等。近期的一項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)了與缺血性腦卒中相關(guān)聯(lián)的新的基因位點(diǎn)：人類染色體12p13的rs12425791、rs11833579位點(diǎn)，且rs12425791位點(diǎn)在兩個(gè)研究人群（北美黑人和荷蘭白人）中得到驗(yàn)證。這兩個(gè)點(diǎn)位于NINJ2基因的旁側(cè)，而且均與NINJ2基因存在強(qiáng)的連鎖不平衡。盡管NINJ2基因的功能尚不清楚，但極有可能是腦卒中的易感基因。因此，本研究以北京市朝

4、陽(yáng)醫(yī)院的缺血性腦卒中病人為研究對(duì)象，從Hapmap公布的數(shù)據(jù)中挑選符合要求的標(biāo)簽SNP，用少量的標(biāo)簽SNP覆蓋比較大的基因區(qū)段，探討NINJ2遺傳多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)系。
　　 目的：⑴探討NINJ2基因的標(biāo)簽SNP多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)系，尋找可能致病基因；⑵探討NINJ2基因的標(biāo)簽SNP多態(tài)性與缺血性腦卒中相關(guān)危險(xiǎn)因素的關(guān)系，尋找可能間接致病基因；⑶識(shí)別基因-環(huán)境相互作用，為有效預(yù)防缺血性腦卒中提供依據(jù)；⑷提供漢族NI

5、NJ2基因各SNP位點(diǎn)頻率數(shù)據(jù)，為其他民族腦卒中流行病學(xué)研究提供可比較的基線數(shù)據(jù)，為缺血性腦卒中的進(jìn)一步研究提供線索。
　　 方法：采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對(duì)照研究，選定NINJ2基因的8個(gè)標(biāo)簽SNP進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。病例組為自2007年4月至2009年11月期間，在朝陽(yáng)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的首次發(fā)病的非致死性缺血性腦卒中病人。診斷標(biāo)準(zhǔn)：所有病例均按中華神經(jīng)科學(xué)會(huì)第四屆全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)(1995)》作

6、為診斷標(biāo)準(zhǔn)，由有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師根據(jù)臨床神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)和頭部CT、MRI、以及頸動(dòng)脈B超檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除血液病、腫瘤、腦血管畸形或動(dòng)脈瘤、自身免疫性疾病等引起的繼發(fā)性腦卒中患者。對(duì)照組選同時(shí)期在該院普外科、泌尿外科、肝膽外科、骨科、口腔科、眼科及耳鼻喉科的符合標(biāo)準(zhǔn)的住院病人。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除血液病、腫瘤、腦血管畸形或動(dòng)脈瘤、自身免疫性疾病以及腦卒中病史者。所有研究對(duì)象均為無血緣關(guān)系的漢族人群。抽取血樣，ACD抗凝，應(yīng)用

7、酚-氯仿法抽提基因組DNA，應(yīng)用美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（上海）的Taqman技術(shù)平臺(tái)，對(duì)所有選定的SNP進(jìn)行基因分型；確定各位點(diǎn)的遺傳模型后，采用多元Logistic回歸分析各位點(diǎn)以及其他因素對(duì)缺血性腦卒中的作用，并應(yīng)用Haploview4.2軟件進(jìn)行推斷，以期發(fā)現(xiàn)有意義的單倍型；通過分層分析、Logistic回歸分析，并結(jié)合單純病例研究方法，分析遺傳多態(tài)性與環(huán)境之間交互作用對(duì)缺血性腦卒中發(fā)病的影響。
　　 結(jié)果：病例組的年齡、B

8、MI、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、空腹血糖均比對(duì)照組高，且吸煙率、飲酒率、高血壓、糖尿病及高脂血癥患病率均高于對(duì)照組；常見危險(xiǎn)因素對(duì)缺血性腦卒中的危險(xiǎn)性(OR)由高到低依次為：高血壓(OR=9.872(7.671，12.706)、吸煙(OR=2.165(1.632，2.873)、糖尿病(OR=2.052(1.531，2.752)、飲酒(OR=1.940(1.376，2.737)、年齡(OR=1.808(1.399，2.337)及高

9、脂血癥(OR=1.452(1.115，1.892)。 NINJ2基因的各標(biāo)簽SNP位點(diǎn)均符合哈德溫伯格平衡。rs10849373位點(diǎn)的基因型頻率等位基因頻率在病例對(duì)照組有顯著性差異。Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，在顯性模型下，相對(duì)于GG基因型攜帶者，AA/GA基因型攜帶者發(fā)生缺血性腦卒中的危險(xiǎn)性是1.384(1.067，1.795)，AA、GA基因型攜帶者其危險(xiǎn)性分別為1.902(1.056，3.428)、1.316(1.002，1.7

10、29);rs10849373位點(diǎn)TT+CT基因型與高脂血癥有正相關(guān)性(OR=1.270(1.023，1.578），rs2535393位點(diǎn)TT+CT基因型與甘油三酯具有負(fù)相關(guān)性(OR=0.269(0.081，0.893))，rs11063794位點(diǎn)AA+GA基因型是糖尿病的保護(hù)性因素(OR=0.786(0.623，0.991))。單倍型研究未發(fā)現(xiàn)與缺血性腦卒中有關(guān)的單倍型。吸煙與rs10849373之間存在交互作用（p＜0.0001，OR

11、=3.101），吸煙可以促進(jìn)rs10849373誘導(dǎo)缺血性腦卒中的發(fā)生，并且可使危險(xiǎn)性增加一倍。另外，單純病例研究顯示：飲酒可能與rs10849373存在交互作用(p=0.0340，OR=1.434(1.028,2.002);rs2535398(OR=0.286)、rs2245918(OR=0.205)與rs10849373呈現(xiàn)負(fù)交互作用（p均小于0.0001），即rs2535398、rs2245918可以減弱rs10849373誘發(fā)缺

12、血性腦卒中的危險(xiǎn)；而rs11063806(p＜0.0001，OR=2.727)、rs2607926（p=0.0033，OR=1.710）與rs10849373呈現(xiàn)正交互作用，即rs11063806、rs2607926可以增加rs10849373誘發(fā)缺血性腦卒中的危險(xiǎn)。
　　 結(jié)論：NINJ2基因中rs10849373位點(diǎn)與缺血性腦卒中存在顯著性關(guān)聯(lián)，該位點(diǎn)還與高脂血癥有相關(guān)性；rs2535393、rs11063794分別與甘油三