正電子成像在神經(jīng)干細胞移植治療帕金森病中的在體顯像研究.pdf

1、【目的】隨著神經(jīng)干細胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究的逐漸深入，在體監(jiān)測干細胞分布、存活、分化、功能狀態(tài)及治療效果等特征性信息的檢測方法越顯重要。本課題以正電子成像技術(shù)(PET)作為在體可視化監(jiān)測手段，客觀準(zhǔn)確地顯示神經(jīng)干細胞移植治療帕金森病(PD)干細胞分化結(jié)果和移植治療效果，建立活體干細胞治療的無創(chuàng)性監(jiān)測技術(shù)平臺，探索干細胞體內(nèi)誘導(dǎo)分化的規(guī)律、條件、質(zhì)量控制和影響因素等，完善神經(jīng)干細胞移植的臨床評估方案，并為其他干細胞治療應(yīng)用探索提供研究

2、基礎(chǔ)。 【材料與方法】從自然流產(chǎn)的人胚胎眼球中分離、培養(yǎng)出人胚胎視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)，經(jīng)流式細胞技術(shù)、G顯帶染色體分析、體外誘導(dǎo)分化、逆轉(zhuǎn)錄PCR分析及免疫熒光染色方法進行神經(jīng)干細胞特異性鑒定。 建立帕金森病SD大鼠模型，隨機分為治療組和對照組。利用立體定位技術(shù)將RPE細胞移植于治療組PD模型大鼠紋狀體內(nèi)；對照組大鼠紋狀體內(nèi)移植相同劑量的生理鹽水。 根據(jù)移植前后大鼠旋轉(zhuǎn)行為改善及腦紋狀體酪氨酸羥化酶(TH

3、)免疫組織化學(xué)染色改變評估干細胞分化結(jié)果和移植治療效果。 確定多巴胺D2受體、多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(DAT)為RPE細胞分化細胞(即多巴胺神經(jīng)元)的標(biāo)志物，11C-Raclopride、11C-β-CFT為相應(yīng)的PET成像放射性示蹤劑。進行移植前后的11C-Raclopride、11C-β-CFTPET顯像，觀測D2受體及DAT變化情況，并運用視覺分析、感興趣區(qū)(ROI)方法分析治療組、對照組移植前后顯像變化，并對結(jié)果做統(tǒng)計分析。

4、 【結(jié)果】經(jīng)鑒定RPE細胞具有神經(jīng)干細胞特征，并能在一定誘導(dǎo)條件下分化為多巴胺能(DA)神經(jīng)元。 移植前1～4周、移植后1～8周大鼠旋轉(zhuǎn)行為檢測結(jié)果：治療組由移植前296±82圈/30分鐘下降至212±102(p=0.0008)；而對照組移植前(299±72)、移植后(310±85)，臨床表現(xiàn)無改善(p=0.4259)。 TH免疫組化染色顯示移植后治療組大鼠紋狀體內(nèi)TH陽性細胞增多、著色較深。而對照組與移植前比較無明

5、顯變化。 11C-RaclopridePET成像顯示模型動物損傷側(cè)D2受體上調(diào)，表現(xiàn)為兩側(cè)不對稱。移植后對照組大鼠(注射生理鹽水)兩側(cè)紋狀體顯影無明顯變化，仍為患側(cè)(右側(cè))顯示較對側(cè)濃聚。而治療組大鼠(移植神經(jīng)干細胞)患側(cè)紋狀體顯示放射性濃聚不同程度下降，兩側(cè)基本對稱。ROI方法測量紋狀體/小腦比值，對照組兩側(cè)移植前后比較無明顯變化(p均小于0.05)，兩側(cè)差異仍然存在；而治療組兩側(cè)比較由移植前p=0.018變?yōu)橐浦埠髉=0.0

6、834，說明兩側(cè)間無明顯差異。 11C-β-CFT成像顯示模型動物損傷側(cè)DAT下降，表現(xiàn)為兩側(cè)不對稱。移植后對照組大鼠兩側(cè)紋狀體顯影無明顯變化，仍為患側(cè)顯示較對側(cè)稀疏。而治療組大鼠患側(cè)紋狀體顯示放射性濃聚不同程度上調(diào)，兩側(cè)基本對稱。ROI方法測量紋狀體/小腦比值，對照組兩側(cè)移植前后比較無明顯變化(p均小于0.05)，兩側(cè)差異仍然存在；而治療組兩側(cè)比較由移植前p=0.001變?yōu)橐浦埠髉=0.6443，說明兩側(cè)間無明顯差異。