中藥YBF抗HIV-1的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染所導(dǎo)致的以全身免疫系統(tǒng)的嚴(yán)重?fù)p害為特征的,患者易于發(fā)生機(jī)會(huì)性感染以及腫瘤為特征的臨床綜合征。全球約95％以上的HIV感染是由HIV-1造成的。自1981年美國報(bào)道首例艾滋病患者以來,全球已有超過2500萬人死于艾滋病。 迄今為止,經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)的用于治療艾滋病的藥物共有29種(包括復(fù)方制劑),根據(jù)它們的作用機(jī)制可將其歸劃為5大類：

2、核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、整合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、融合抑制劑。目前,臨床上治療艾滋病主要采用高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(Highly.Active Anti-Retroviral Therapy,HAART),該療法可減少患者體內(nèi)的病毒載量,延長患者生命。但由于這些藥物均是由化學(xué)合成的方法獲得,具有價(jià)格昂貴,毒副作用強(qiáng),耐藥性不斷發(fā)生,不能徹底清除人體內(nèi)的HIV等缺點(diǎn),因而在一定程度上限制了其的應(yīng)用。而天然產(chǎn)物具有結(jié)構(gòu)

3、多樣性、生物活性多樣性、較低的毒副作用以及廣泛的來源等特點(diǎn),在研發(fā)新藥及藥物先導(dǎo)化合物中發(fā)揮越來越重要的作用。 本課題的研究內(nèi)容是：從中藥YBF的粗提物開始,研究其對HIV-1的抑制活性,在體外藥效學(xué)活性檢測指導(dǎo)下對其進(jìn)行提取分離純化,直至找出其抗HIV-1的有效部位或有效群體,以期達(dá)到分離出YBF抑制HIV-l活性的有效部位。藥物提取與分離部分的實(shí)驗(yàn)方法主要包括柱層析(Column Chromatography)和薄層層析(T

4、hin-layer Chromatography,TLC);體外藥效學(xué)檢測的方法包括細(xì)胞病變觀察法(CPE)和p24抗原檢測法；藥物作用機(jī)理的研究主要采用Biacore技術(shù)檢測藥物與靶點(diǎn)蛋白的結(jié)合情況。本實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)胞株為MT4細(xì)胞,病毒株為HIV-1IIIB。通過實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論:YBF30％乙醇提取物比其他不同濃度的乙醇提取物抗HIV作用更好；對其做進(jìn)一步的分離純化,得到最后的兩個(gè)有效部位A3O2、B6;經(jīng)p24法檢測A3O2在125μ

5、g/mL的濃度下對HIV-1的抑制率為74.8815％,B6在125μg/mL的濃度下對HIV-1的抑制率為73.7115％,計(jì)算得出它們的治療指數(shù)分別為：41.22、43.59,均大于10,因此A3O2、B6可以作為抗HIV-1的藥物做進(jìn)一步的研發(fā)。對于作用靶點(diǎn)的研究,本研究采用Biacore技術(shù)檢測了A3O2、B6的與Vif蛋白的結(jié)合情況,在20μg/mL的濃度下,A3O2與Vif的結(jié)合量為69.6RU,B6與Vif的結(jié)合量為59.