DAP12-TREM2復(fù)合物在神經(jīng)炎癥中的功能研究.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動規(guī)范( 試行) 》。另外，該學(xué)位論文為( 卜l 習(xí)簪 ) 課題( 組)的研究成果，獲得( 卜l 訇孕 ) 課題( 組) 經(jīng)費或?qū)嶒炇业馁Y助，在( ＼、囡魯 ) 實驗室完成。( 請在以上括號內(nèi)填寫課題或課題組負責(zé)入或?qū)嶒炇颐Q，未有此項

2、聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)聲明入( 簽名) ：鉚力湯，籮年I ) 月刁日摘要摘要2 型髓系細胞觸發(fā)受體( T r i g g e r i n gr e c e p t o r e x p r e s s e d o n m y e l o i dc e l l s 2 ，T R E M 2 ) 是D A P l 2 相關(guān)受體膜蛋白，其主要表達于小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞和其他的髓系細胞中。前期的研究表明T R E M 2 具有抑制炎癥反

3、應(yīng)和促進凋亡神經(jīng)元吞噬的兩大生理功能，而D A P l 2 卻表現(xiàn)出抑制炎癥和促進炎癥兩種相反的生理作用，對于其具體的機制還需要深入探討。最近的全基因組關(guān)聯(lián)分析( G e n o m e ．w i d ea s s o c i a t i o ns t u d y , G W A S ) 發(fā)現(xiàn)，T R E M 2 基因的突變能顯著增加患阿爾茨海默病( A l z h e i m e rd i s e a s e ，A D ) 的風(fēng)險。隨

4、后一系列的研究確定了T R E M 2 作為晚發(fā)型A D ( L a t e ．o n s e t A D ，L O A D ) 的一個新風(fēng)險基因，其中R 4 7 H突變導(dǎo)致患A D 的風(fēng)險系數(shù)與A P O E ￡4 相當(dāng)。基于網(wǎng)絡(luò)整合方法( I n t e g r a t i v en e t w o r k ．b a s e da p p r o a c h ) 也揭示了D A P l 2 作為L O A D 相關(guān)蛋白網(wǎng)絡(luò)分子的關(guān)鍵

5、調(diào)節(jié)因子。然而T R E M 2 和D A P l 2 在A D 發(fā)生發(fā)展進程中其起著怎樣的作用還有待于進一步的研究。在本研究中，我們證實了T R E M 2 受體類似于淀粉樣前體蛋白( A m y l o i dp r e c u r s o rp r o t e i n ，A P P ) 的酶剪切加工過程，首先被切割成可溶性的胞外域( S o l u b l eT R E M 2 ，s T R E M 2 ) 和C 端片段( C —

6、t e r m i n a l f r a g m e n t ．C T F ) ，T R E M 2 ．C T F進而被丫．分泌酶剪切成胞內(nèi)片段( I n t r a c e l l u l a rd o m a i n ，I C D ) 。此外，我們發(fā)現(xiàn)，在H E K 2 9 3 T 和B V 2 細胞中共表達D A P l 2 與T R E M 2 蛋白后，T R E M 2 ．C T F 蛋白水平顯著增加。與之相反，D A P

7、l 2 D 5 0 A 突變體則喪失增加T R E M 2 ．C T F 水平的功能，免疫共沉淀實驗表明D 5 0 A 突變與T R E M 2 失去相互作用。隨后的實驗證實，D A P l 2 通過與T R E M 2 相互作用從而抑制T R E M 2 ．C T F 蛋白的降解。此外，在B V 2 小膠質(zhì)細胞模型中，用特異性s i R N A 干擾T r e m 2 或D a p l 2 基因后都能顯著增加L P S 誘導(dǎo)的I L

8、．1 6 和I L ．6 促炎基因的m R N A 水平。并且我們實驗發(fā)現(xiàn)D A P l 2 可以通過調(diào)節(jié)J N K 信號通路調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。而在B V 2 中過表達T R E M 2 ．F L 和T R E M 2 ．C T F 發(fā)現(xiàn)，T R E M 2 ．C T F 具有T R E M 2 ．F L 的功能，都能顯著抑制L P S 誘導(dǎo)的I L ．1 1 3 和I L ．6m R N A 水平。最后，我們在T r e m 2 基因敲除