靶向急性髓系白血病干細(xì)胞的抗CD123單克隆抗體的制備及功能試驗(yàn).pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文靶向急性髓系白血病干細(xì)胞的抗CD123單克隆抗體的制備及功能試驗(yàn)姓名：黃亮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：血液病學(xué)指導(dǎo)教師：周劍峰201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文2挑選陽性孔，再進(jìn)行數(shù)輪有限稀釋和篩選，挑選出能分泌抗CD123單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，供后續(xù)功能試驗(yàn)用。第三部分：建立IL3增殖拮抗實(shí)驗(yàn)和急性白血病免疫缺陷NODSCID小鼠異種移植模型，分別檢測(cè)這11株抗體競(jìng)爭(zhēng)性拮抗IL3IL3

2、RA交聯(lián)及IL3的促增殖效應(yīng)，介導(dǎo)ADCC效應(yīng)抑制白血病CD34CD38細(xì)胞歸巢和CD45細(xì)胞植入，降低腫瘤負(fù)荷并延長(zhǎng)生存期的靶向治療效應(yīng)?！窘Y(jié)果】【結(jié)果】除利用TF1細(xì)胞免疫未能獲得抗體以外，我們利用制備的重組蛋白和質(zhì)粒兩種抗原免疫，各獲得了3株和8株能分泌抗CD123抗體的雜交瘤細(xì)胞株，并經(jīng)Elisa和間接流式證實(shí)雜交瘤株所分泌抗體與IL3RAECDFc融合蛋白、TF1和8G9細(xì)胞表面CD123的親和力，且質(zhì)粒免疫獲得的1株抗體在后

3、續(xù)的IL3增殖拮抗實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)能阻斷細(xì)胞膜表面IL3IL3RA的交聯(lián)以及IL3的促增殖效應(yīng)，表明是一株拮抗抗體。為進(jìn)一步驗(yàn)證治療性抗體抗腫瘤功能，還建立并驗(yàn)證了急性白血病免疫缺陷NODSCID小鼠模型。【結(jié)論】【結(jié)論】利用質(zhì)粒免疫、腺病毒加強(qiáng)的方式制備抗體效率最高，更易獲得有功能的治療性抗體。共獲得11株能分泌抗CD123單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，通過IL3增殖拮抗實(shí)驗(yàn)，從中篩選出1株能競(jìng)爭(zhēng)性拮抗IL3IL3RA的交聯(lián)及IL3的促增殖效