通過急性髓性白血病干細(xì)胞表面CD123導(dǎo)入溶瘤腺病毒的研究.pdf

1、背景:白血病是由一系列與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化與死亡相關(guān)的眾多基因變異所導(dǎo)致的異質(zhì)性疾病,是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤。化療和移植是目前白血病治療的主要手段,但大多數(shù)患者只能獲得短暫緩解,最終因復(fù)發(fā)或耐藥而死亡。研究表明,白血病患者體內(nèi)存在著一群比例極少的白血病干細(xì)胞,其在白血病發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用,被認(rèn)為是白血病耐藥和復(fù)發(fā)的主要根源,針對(duì)白血病干細(xì)胞的治療策略,有望徹底根治白血病。
　　 設(shè)計(jì)及目的:本課題根據(jù)急性髓性白血病干細(xì)胞表面表達(dá)

2、CD123,而造血干細(xì)胞表面不表達(dá)CD123的特點(diǎn),設(shè)計(jì)并構(gòu)建了能夠特異靶向急性髓性白血病干細(xì)胞的溶瘤腺病毒,該病毒不僅能夠靶向白血病干細(xì)胞,還解決了傳統(tǒng)的5型腺病毒不能有效侵染白血病干細(xì)胞的難題。此病毒具有兩個(gè)優(yōu)點(diǎn),(1)利用Survivin啟動(dòng)子控制病毒復(fù)制增殖所必需的基因E1A,使腺病毒只能在Survivin陽性表達(dá)的白血病干細(xì)胞中增殖,而不能在Survivin表達(dá)呈陰性的正常細(xì)胞中復(fù)制。(2)溶瘤腺病毒攜帶融合基因sCAR-IL

3、-3,通過表達(dá)sCAR-IL-3融合蛋白,使融合蛋白一端與腺病毒的fiber相結(jié)合,另一端特異的與急性髓性白血病干細(xì)胞表面IL-3受體α鏈CD123相結(jié)合,從而改變腺病毒的天然噬性,使腺病毒專一靶向急性髓性白血病干細(xì)胞,從而達(dá)到特異殺滅白血病干細(xì)胞的目的,防止白血病的復(fù)發(fā),徹底治愈白血病。
　　 方法：(1)構(gòu)建病毒包裝所需穿梭質(zhì)粒;(2)在HEK293細(xì)胞中通過同源重組包裝病毒;(3)通過細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn),進(jìn)行殺傷性分析和安全性

4、評(píng)價(jià);(4)再通過形態(tài)學(xué)分析,凋亡細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn),電鏡觀察重組目的病毒誘導(dǎo)的凋亡。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了靶向急性髓性白血病干細(xì)胞的溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3,體外實(shí)驗(yàn)表明Ad.sp-E1A-sCAR-IL-3能夠靶向急性髓性白血病干細(xì)胞,能夠達(dá)到抑制白血病干細(xì)胞增殖,并誘導(dǎo)其凋亡,并具有較高的安全性。
　　 結(jié)論：及意義:本研究首次利用溶瘤腺病毒靶向急性髓性白血病干細(xì)胞,為白血病的治療提供了新的思路